تکنیک ها
روش انجام تست MTT
روش انجام آزمایش MTT
تست MTT جهت دستیابی به درصد زنده مانی (Viability) تحت تأثیر دارو ها و مواد مختلف انجام می پذیرد. این روش یک روش ساده بوده که دستیابی سریع به میزان سمیت مواد و به دست آوردن IC50 را امکان پذیر کرده است. باید توجه داشت که روش های بررسی میزان سمیت مواد مختلف و متنوع بوده و روش MTT یکی از این روش هاست و به دلیل دقت بالا و سادگی آن بیشتر مورد استقبال پژوهشگران قرار می گیرد.
در این روش سلول ها با دز های مختلف دارو تیمار شده و درصد زنده مانی در هریک از آن ها به دست می آید. اهمیت آن در بدست آوردن IC50 به معنای غلظتی که در آن نصف سلول ها می میرند می باشد. چرا که هر دارویی پس از سنتز شدن و ساخته شدن باید محدوده غلظتی مؤثر آن محاسبه شود تا بتوان در آن محدوده غلظتی تحقیقات گسترده تری به انجام رسانده و به بررسی آن پرداخت.
عموماً تست MTT در پلیت های چندخانه (multi well plate) ران شده و در چاهک های مختلف آن دز های مختلف دارویی تیمار شده و در یک چاهک هیچ دارویی تیمار نمی شود و به عنوان کنترل مثبت در نظر گرفته می شود. در نهایت میزان سلول های هر یک از چاهک ها نسبت به سلول ها کنترل مثبت سنجیده شده و درصد زنده مانی به دست می آید.
واژه MTT متعلق به ماده‌ای تحت عنوان 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide می باشد که در مجاورت سلول های یوکاریوتی زنده، به داخل آن ها نفوذ کرده و در میتوکندری سلول ها بلور های فورمازان (Formazan) تشکیل می دهد. فورمازان یک ترکیب کروموفور می باشد که در محدوده طول موج 570 نانومتر جذب نوری داشته و این ویژگی موجب گشته تا پس از تیمار سلول های زنده با محلول MTT و تشکیل بلور های فورمازان در میتوکندری، با بررسی جذب نوری نمونه ها به میزان سلول های زنده براساس جذب دست یافت.
بدین شکل که هرچقدر میزان جذب بیشتر باشد نشان دهنده وجود سلول های زنده بیشتری می باشد. لذا در تست MTT پس از تیمار سلول ها با دارو و یا مواد مورد نظر، محلول MTT به آن ها اضافه شده و پس از گذشت زمان مورد نیاز با بررسی میزان جذب نوری هر یک از نمونه ها، درصد زنده مانی هر یک از دز های مختلف محاسبه می گردد و نسبت به نمونه کنترل مورد سنجش قرار می گیرد.
اگرچه کلیات تست MTT ساده بوده و خیلی پیچیده نیست؛ اما در انجام تست باید دقت کافی بعمل آید و محاسبات دقیق انجام شود. درون چاهک های پلیت 96 خانه، باید تعداد مشخصی سلول seed شده و از حد مجاز نباید کمتر یا بیشتر باشد. تعداد سلول ها درون هر چاهک باید بین 103 الی 105 سلول باشد.
اگر زمان مورد نیاز تیمار دارو کم بوده و یک روز بیشتر نباشد می توان تعداد سلول های زیادی seed کرد اما اگر زمان تیمار به سه روز برسد نباید میزان زیادی سلول در چاهک seed کرد؛ چراکه این امر موجب رشد بیش از حد سلول ها درون چاهک های کنترل مثبت شده و پس از گذشت مدتی سلول ها شروع به مردن می کنند و در نتیجه نتایج تست اشتباه خواهد بود. همچنین محاسبات محلول سازی دارو و ایجاد سریال رقت دارویی درون چاهک ها باید با دقت زیادی انجام پذیرد تا نتایج به درستی حاصل شوند.
آزمایشگاه ژنیران طی دوره کارآموزی کشت سلول های جانوری، تمامی روش ها و فرمول های محاسبه رقت سازی و همچنین شمارش سلولی را به دانشجویان آموزش داده و هر یک از دانشجویان به تنهایی سلول های خود را به دارو های مختلف تیمار کرده و تست MTT را به انجام می رسانند.
هزینه انجام تست mtt?
جهت استعلام قیمت و جزییات با ما تماس بگیرید
سلام وقتتون بخیر
آیا برای زدن رنگ MTT حتما باید محیط رویی سلول را خارج کنیم؟چون در بعضی پروتکل ها اشاره شده رنگ را به مایع رویی اضافه کنیم. در این صورت کدام مورد صحیح هست؟
برای آزمایش‌های حساس، مانند غربالگری داروها یا بررسی فعالیت متابولیکی دقیق، حذف محیط رویی و افزودن MTT در محیط تازه (مانند PBS یا DMEM بدون سرم) معمولاً ایمن‌تر و دقیق‌تر است. اگر تأثیر مواد موجود در محیط رویی برای شما اهمیت دارد، میتوانید از روش دوم استفاده کنید، اما باید احتمال تداخل را در تحلیل نتایج در نظر بگیرید.
با سلام.
آموزش mtt و transfection دارید؟ و هزینه چند هست؟ و زمان و مدت دوره آموزش چقدر هست؟
با تشکر.
آموزش mtt در کارآموزی کشت سلول تدریس میشود
سلام وقتتون بخیر، از تست MTT برای برسی اثر سمیت سلولی ناشی از اعمال تیمار نانوذرات در زمان کشت گیاه هم میشه استفاده کرد؟ ب این صورت ک ما میخوایم ببینیم اون نانو ذره ای ک هنگام کشت گیاه استفاده کردیم، در گیاه تجمع پسدا کرده ک بعد با مصرف گیاه باعث ایجاد سمیت در بدن بشه؟
سلام، برای اینکه تجمع یک ماده در سلول را اندازه‌گیری کنید باید روش های بررسی آپتیک به کار بگیرید. به عنوان مثال نانوذره با خاصیت بازنشر را می توان پس از تیمار زیر میکروسکوپ فلورسنت یا دستگاه فلوسایتومتر بررسی کرده و آپتیک را مشخص کرد. تست MTT در سمیت سنجی مورد استفاده است و از این تست برای هر سلولی که تولید NADH دارد می توان استفاده نمود.
روش عصاره گیری MTT برای داربست هیدروژلی به چه صورت می باشد؟
سلام دوست عزیز در دوره کشت پیشرفته دقیقا همین مباحث به شما آموزش داده میشه در صورت تمایل به یادگیری میتوانید در این دوره شرکت کنید و با آزمایشگاه جهت ثبت نام تماس بگیرید.
منظور از سلول سیت شده چیست؟
سلام سلول seed شده یعنی سلول داخل پلیت کاشته شود
سلام یعنی سلولی که در کف فلاسک یا پلیت قرار گرفته و کاشته شده باشه.
سلام برای تست MTTچقدر نمونه نیاز هست که ارسال بشه و نتایج کی بدستمون میرسه
سلام دوست عزیز میزان نمونه بسته به پروژه شما دارد که چقدر سلول باید در تعداد چاهک هایی که محاسبه میکنید سید شوند. و تایم مورد نظر هم باز هم بستگی به پزوژه شما دارد (۲۴،۴۸و یا ۷۲ ساعته) . جهت اطلاعات بیشتر کارشناسان ما با شما تماس خواهند گرفت