تکنیک ها
تست TSI: اساس، روش، کاربردها و تفسیر
مقدمه‌ای بر تست TSI
اکثر باکتریها توانایی تخمیر کربوهیدرات‌ها، به ویژه قندها را دارند. هر باکتری می‌تواند فقط برخی از قندها را تخمیر کند و این در حالی است که قادر به تخمیر سایر قندها نیست؛ بنابراین، قندهایی که یک باکتری می‌تواند تخمیر کند و قندهایی که قادر به تخمیر آنها نیست، از ویژگی‌های باکتری محسوب می‌شوند و در نتیجه معیار مهمی برای شناسایی آن است.
تست TSI، یک آزمایش میکروبیولوژیکی است که به دلیل توانایی آن در آزمایش توانایی یک میکروارگانیسم در تخمیر قندها و تولید سولفید هیدروژن، به این نام، نام‌گذاری شده است.
یک آگار اسلنت (شیب‌دار) از یک محیط کشت مخصوص با چندین قند تشکیل دهنده یک رنگ حساس به pH (فنل قرمز)، 1 درصد لاکتوز، ۱ درصد ساکارز، 0.1درصد گلوکز و همچنین تیوسولفات سدیم و سولفات آهن یا سولفات آمونیوم آهن برای انجام تست استفاده می‌شود.
همه این مواد زمانی که با هم مخلوط می‌شوند و مایل به یک سمت منجمد و سفت می‌شوند، منجر به تشکیل یک لوله آزمایش آگار با زاویه مایل می‌شود. شکل مایل این محیط، مجموعه‌ای از سطوح را فراهم می‌کند که یا در درجات مختلف در معرض هوای حاوی اکسیژن هستند (یک محیط هوازی) یا در معرض هوا نیستند (محیط بی‌هوازی) که تحت آن الگوهای تخمیر ارگانیسم‌ها تعیین می‌شوند.
هدف
برای تعیین توانایی یک موجود زنده در تخمیر گلوکز، لاکتوز و ساکارز و توانایی آنها برای تولید سولفید هیدروژن.
اساس
تست tsi آگار با استفاده از آگار tsi برای تمایز بین موجودات بر اساس تفاوت در الگوهای تخمیر کربوهیدرات و تولید سولفید هیدروژن طراحی شده است. تخمیر کربوهیدرات با تولید گاز و تغییر رنگ نشانگر pH از قرمز به زرد نشان داده می‌شود.
برای تسهیل مشاهده الگوهای مصرف کربوهیدرات، TSI آگار حاوی سه قند تخمیری، لاکتوز و ساکارز در غلظت 1% و گلوکز در غلظت 0.1% است. به دلیل ساخت اسید در طی تخمیر، pH کاهش می‌یابد. نشانگر پایه اسید فنول رد برای تشخیص تخمیر کربوهیدرا است که با تغییر رنگ محیط کربوهیدرات از قرمز نارنجی به زرد در حضور اسیدها نشان داده می‌شود.
در صورت دکربوکسیلاسیون اکسیداتیو پپتون، محصولات قلیایی ساخته شده و pH افزایش می‌یابد. این امر با تغییر رنگ محیط از قرمز نارنجی به قرمز تیره نشان داده می‌شود. حضور تیوسولفات سدیم و سولفات آمونیوم آهن موجود در محیط منجر به تشخیص تولید سولفید هیدروژن می‌شود و با رنگ سیاه در لبه لوله مشخص می‌شود.
برای تسهیل تشخیص ارگانیسم‌هایی که فقط گلوکز را تخمیر میکنند، غلظت گلوکز یک‌دهم غلظت لاکتوز یا ساکارز است. مقدار ناچیز تولید اسید در شیب لوله در طی تخمیر گلوکز به سرعت اکسید می‌شود و باعث می‌شود محیط قرمز نارنجی باقی بماند یا به pH قلیایی بازگردد. در مقابل، واکنش اسیدی (زرد) در لبه لوله حفظ می‌شود؛ زیرا تحت اکسیژن کمتری قرار دارد.
پس از اتمام گلوکز محدود، ارگانیسم‌هایی که قادر به انجام این کار هستند شروع به استفاده از لاکتوز یا ساکارز میکنند. برای بهبود وضعیت قلیایی در قسمت شیب‌دار، میتوان با شل بستن درپوش لوله، باعث تبادل آزاد هوا شد.
محیط کشت
TSI آگار
هضم آنزیمی کازئین (۵ گرم)، هضم آنزیمی بافت حیوانی (۵ گرم)، پپتون غنی شده با مخمر (۱۰ گرم)، دکستروز (۱ گرم)، لاکتوز (۱۰ گرم)، ساکارز (۱۰ گرم)، سیترات آمونیوم آهن (۰٫۲ گرم)، NaCl (5 گرم)، تیوسولفات سدیم (۰٫۳ گرم)، فنول رد (۰٫۰۲۵ گرم)، آگار (۱۳٫۵ گرم)، در ۱۰۰۰ میلی‌لیتر، pH 7.3 .
روش تست TSI
- با یک سوزن مستقیم تلقیح، بالای کلنی ایزوله شده را لمس کنید.
- ابتدا TSI را با ضربه زدن از مرکز محیط به پایین لوله و سپس رگه زدن سطح شیب‌دار آگار تلقیح کنید.
- درپوش را شل بگذارید و لوله را در دمای ۳۵-۳۷ درجه سانتیگراد در هوای محیط به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت انکوبه کنید.
- واکنش محیط را بررسی کنید.
نتایج مورد انتظار
- واکنش قلیایی/اسیدی (سطح قرمز/عمق زرد): این واکنش فقط نشان دهنده تخمیر دکستروز است.
- واکنش اسید/اسید (سطح زرد/ عمق زرد): نشان دهنده تخمیر دکستروز، لاکتوز و یا ساکارز است.
- واکنش قلیایی/قلیایی (سطح قرمز، عمق قرمز): عدم تخمیر کربوهیدرات.
- سیاه شدن محیط: در حضور H2 رخ می‌دهد.
- تولید گاز: حباب‌ها یا ترک‌های موجود در آگار نشان دهنده تولید گاز (تشکیل CO2 و H2) است.
کاربردهای تست TSI
- این آزمایش عمدتاً برای تمایز اعضای خانواده (انتروباکتریاسه) Enterobacteriaceae از سایر باکتریهای (باسیل‌های) گرم منفی استفاده می‌شود.
- همچنین در تمایز بین انتروباکتریاسه ها بر اساس الگوهای تخمیر قند آنها استفاده می‌شود.
محدودیت‌های تست TSI
- توصیه می‌شود برای شناسایی کامل، آزمایشات بیوشیمیایی، ایمونولوژیکی، مولکولی یا طیف سنجی جرمی روی کلنی‌های حاصل از کشت خالص انجام شود.
- ضربه زدن به قسمت عمقی محیط کشت مهم است. عدم ضربه به این قسمت، نتایج این آزمایش را باطل می‌کند. یکپارچگی آگار باید هنگام ضربه زدن حفظ شود. در حین انجام این آزمایش باید درپوش‌ها شل شوند و در غیر این صورت نتایج به دست آمده اشتباه خواهد بود.
- TSI آگار باید در دوره انکوباسیون ۱۸-۲۴ ساعته بررسی شود. بررسی زودتر و یا دیرتر از این بازه زمانی باعث ایجاد واکنش منفی کاذب خواهد شد.
- ارگانیسمی که سولفید هیدروژن تولید می‌کند ممکن است اسید تولید شده در عمق محیط را بپوشاند. با این حال، تولید سولفید هیدروژن نیاز به یک محیط اسیدی دارد، بنابراین بخش عمق محیط باید اسید در نظر گرفته شود.
- TSI در تشخیص سولفید هیدروژن در مقایسه با سایر محیط‌های حاوی آهن، مانند محیط سولفید ایندول (SIM) ، چندان حساس نیست.
- گونه‌ها یا سویه‌های خاصی ممکن است واکنش‌های تأخیری ایجاد کنند یا به طور کامل در تخمیر کربوهیدرات به روش ذکر شده شکست بخورند.
همچنین بخوانید:
مترجم: مریم محجوب
در مورد تست های گالری توضیح بدهید
تست گالری یک آزمایش خون پیشرفته است که با بررسی DNA آزاد در خون، می‌تواند بیش از ۵۰ نوع سرطان را در مراحل اولیه شناسایی کند. این تست برای غربالگری و تشخیص زودهنگام به‌کار می‌رود، اما جایگزین قطعی روش‌های تصویربرداری یا تشخیص پزشکی سنتی نیست.
سلام محیط tsi درعمق زرد ودرسطح قرمز شده باکتری موکوئیدی شبیه کلبسیلا هست تفسیر ش چی میشه؟باتشکر
K/A در TSI = فقط گلوکز را تخمیر می‌کند، اما لاکتوز و ساکاروز را تخمیر نمی‌کند.
اگر کلنی موکوئیدی باشد، احتمالاً Klebsiella pneumoniae یا Enterobacter cloacae است.
برای تشخیص قطعی، تست‌های تکمیلی مانند IMViC، اورنیتین و سیترات توصیه می‌شود.
سلام اگر سطح محیط tsi قرمز و عمقش زرد باشه یک alk/a هست و اینو میتونیم به چه باکتری نسبت بدیم؟؟؟؟
با یک محیط مشخص نمیشود باید تست های IMVIC گذاشته شود
سلام،چرا نمیتوان به صورت قطعی لوله ای که در آن سالمونلا کشت شده را از لوله ای که در آن پروتئوس کشت شده تشخیص داد و جدا کرد؟
سوال شما اشتباه است چرا که در تست اوره از پروتئوس مثبت و سالمونلا منفی می باشد
سلام اگر که رنگ سطح لوله توtsi زرد و عمق قرمز شد باکتری چ باکتریی میتونه باشه؟
با یک تست هیچ وقت نمیشه گونه باکتری رو مشخص کرد. اما احتمالا اگر h2s منفی باشه سالمونلاست
با سلام و احترام ، در مورد روش nusch 1980 اطلاعاتی دارید ؟
روش Nusch 1980 برای اندازه‌گیری کلروفیل a، b، c و کاروتنوئیدها در فیتوپلانکتون‌ها است.
با استخراج در استون ۹۰٪ و سنجش جذب نوری با اسپکتروفتومتر در طول‌موج‌های خاص انجام می‌شود.
روشی ساده، دقیق و استاندارد در مطالعات بوم‌شناسی آب است.
سلام
با تشکر از ارایه مطالب علمی
لطفاً
در مورد تهیه رقت های سریال 10وشمارش باکتریها توضیح دهید
با سلام، جهت مشاهده متن و ویدیو آموزشی این موارد اینجا کلیک کنید.
سلام اگر تمام محیط سیاه شود،تخمیر قند را به چه شکل تفسیر میکنیم؟
برخی باکتری ها تیوسولفات سدیم را به سولفیت و گاز H2S احیا می کنند و گاز H2S در حضور سولفات آهن رسوب سیاه رنگ سولفید آهن را ایجاد می کند
از این گروه با کتریها میتوان به باکتریهای خانواده سالمونلا مثل (سالمونلا تیفی موریوم، سالمونلا انتریکا،سالمونلا تیفی) و پروتئوس اشاره کرد که میتونن بعد از تخمیر قندها گاز (سولفید هیدروژن) H2Sتولید کنن و این رنگ محیط کشت شما رو سیاه میکنه
منتها اینکه رنگ محیط کشت شما کلا سیاه باشه نشان دهنده این هست که شما یا کشتتون کهنه هست یا مسیر رو درست طی نکردین
نقش ساکاروز در این تست چیه؟
سلام دلیل آن این است که بیشتر پاتوژن های روده قند های ساکارز و لاکتوز را تخمیر نمیکنند. اما غیر پاتوژن های روده از این قند ها استفاده کرده و آن ها را تبدیل به اسید میکنند.
سلام چه مقدار از محلول باید داخل لوله ازمایشگاهی ریخته شود
سلام تا نیمه لوله
باعرض سلام واحترام اگر سطح TSI یه کوچولو قرمز شد حالت Alk/A درنظر میگیریم؟
سلام بله همینطوره