اصول وسترن بلات و کاربردهای آن

وسترن بلات (که بعضاً به آن ایمونوبلوت پروتئین گفته می شود) یک روش آزمایشگاهی است که برای تشخیص مولکولهای خاص پروتئین از میان مخلوطی از پروتئین ها استفاده می شود که به طور گسترده در زیست شناسی مولکولی و ایمنی زایی مورد استفاده قرار می گیرد. این مخلوط می تواند شامل تمام پروتئین های مرتبط با یک بافت یا نوع سلول خاص باشد. از وسترن بلات نیز می توان برای ارزیابی اندازه پروتئین مورد نظر و برای اندازه گیری میزان بیان پروتئین استفاده کرد.

وسترن بلات (western blot) به طور گسترده در بیوشیمی برای تشخیص کیفی پروتئین های منفرد و اصلاح پروتئین ها (مانند تغییرات پس از ترجمه) مورد استفاده قرار می گیرد. تخمین زده می شود حداقل 8-9٪ از کل انتشارات مربوط به پروتئین دارای تکنیک وسترن بلات باشد. این به عنوان یک روش کلی برای شناسایی حضور یک پروتئین منفرد خاص در مخلوط پیچیده پروتئین ها استفاده می شود. یک تخمین نیمه کمی از یک پروتئین می تواند از اندازه و شدت رنگ یک باند پروتئین در غشای لکه حاصل شود. علاوه بر این ، با استفاده از یک سری رقیق سازی پروتئین خالص از غلظت های شناخته شده می توان مورد استفاده قرار گرفت تا تخمین دقیق تری از غلظت پروتئین فراهم شود. وسترن بلات به طور معمول برای تأیید تولید پروتئین پس از کلونینگ استفاده می شود . همچنین در تشخیص پزشکی ، به عنوان مثال ، در آزمایش HIV یا تست BSE استفاده می شود. برای تأیید تولید پروتئین پس از کلونینگ استفاده می شود. همچنین در تشخیص پزشکی ، به عنوان مثال ، در آزمایش HIV یا تست BSE استفاده می شود.

آزمایش تأییدکننده HIV توسط وسترن بلات (western blot) برای تشخیص آنتی بادی ضد HIV در نمونه سرم انسانی استفاده می کند. پروتئین های شناخته شده از سلول های آلوده به HIV بر روی غشایی جدا می شوند.

از وسترن بلات همچنین به عنوان آزمایش قطعی برای بیماری Creutzfeldt-Jakob Disease استفاده می شود که نوعی بیماری پریون مربوط به مصرف گوشت گاو آلوده با آنسفالوپاتی اسفنجی گاوی است.

کاربرد دیگر در تشخیص تولارمی (tularemia) است.  ارزیابی توانایی وسترن بلات در تشخیص آنتی بادی      F. tularensis نشان داد که حساسیت آن تقریباً 100٪ است.

برخی از انواع آزمایش بیماری لایم (Lyme) از وسترن بلات استفاده می کنند.  از وسترن بلات همچنین می توان به عنوان یک آزمایش تأیید کننده برای عفونت هپاتیت B و عفونت) HSV-2 تبخال نوع 2) استفاده کرد.

کاربردهای بیشتر تکنیک وسترن بلات شامل کاربرد آن توسط آژانس جهانی مبارزه با دوپینگ  (WADA) است.

 سه مرحله مهم در وسترن بلات عبارتند از:

•             جداسازی کل پروتئین‌ها بر اساس اندازه با استفاده از SDS-PAGE

•              انتقال پروتئین‌های تفکیک شده از ژل به یک بستر جامد

•           شناسایی اختصاصی پروتئین هدف با آنتی‌بادی مناسب