آشنایی با PCR

تکنیک واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR) یک روش سریع و مقرون به صرفه برای تکثیر و کپی قطعاتی از DNA می باشد. در تکنیک PCR برای تکثیر قطعه مورد نظر از تغییرات حرارتی استفاده می شود. برای انجام واکنش زنجیره ای پلی مراز از دستگاه ترمال سایکلر (Thermal cycler) استفاده می شود. در ابتدا واکنش PCR با قرار دادن لوله های آزمایش داخل حمام های آب گرم با دماهای مشخص انجام میشد. اما دستگاه های امروزی به بلوک های فلزی مجهز می باشند که حرارت پذیر بوده و با توجه به برنامه ی دمایی و زمانی که به دستگاه داده می شود، قطعه ی مورد نظر تکثیر می شود.

واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR)، دارای مراحل دناتوراسیون(Denaturation)، مرحله ی annealing و مرحله ی پلیمریزاسیون می باشد.

در مرحله ی دناتوراسیون یا denaturation قطعات DNA به مدت 30 تا 45 ثانیه در درجه حرارت 92 تا 95 درجه سانتی گراد قرار داده می شود تا دو رنجیره ی DNA از هم باز شوند.

در مرحله ی بعدی دما در محدوده ی 55 تا 65 درجه سانتی گراد قرار می گیرد تا پرایمر به رشته ی مورد نظر متصل گردد.

در مرحله پایانی یا پلیمریزاسیون آنزیم DNA پلی مراز وارد عمل شده و با استفاده از نوکلئوتید های تری فسفات از روی رشته ی الگو DNA، رشته ی جدید سنتز می شود. تکنیک PCR، کاربردهای متعددی دارد که می توان به تکثیر کپی های متعدد از ژن مورد مطالعه، بررسی حضور یا عدم حضور ژن مورد نظر، تشخیص بیماری های قبل از تولد، تعیین جنسیت جنین و تشخیص بیماریها اشاره نمود.

دوره کارآموزی بیوانفورماتیک آزمایشگاه ژنیران