TUNEL Staining چیست؟

TUNEL Staining چیست؟

Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling ، همچنین به عنوان رنگ آمیزی TUNEL یا روش TUNEL شناخته می شود که یک روش قوی برای تشخیص آپوپتوز است.

این نوع مرگ سلولی با تکه تکه شدن DNA هسته ای تا نوکلئازها مشخص می شود. رنگ آمیزی TUNEL برای شناسایی آپوپتوز با شناسایی این شکستگی های DNA ایجاد شد.

آپوپتوز نوعی مرگ سلولی تنظیم شده از نظر ژنتیکی است که برای بسیاری از فرآیندهای بیولوژیکی ، از جنین زایی تا پیری ، حیاتی است و حتی در بسیاری از بیماری ها نقش دارد.

آپوپتوز در چندین روش درمانی برای بیماری ها مانند داروهای ضد التهاب غیر استروئیدی و ضدسرطان هدف قرار گرفته است. تحقیقات برای ایجاد روشهای درمانی جدید با هدف اصلاح آپوپتوز برای درمان تعدادی از بیماریها ادامه دارد.

به همین دلیل ، رنگ آمیزی TUNEL به ابزاری اساسی بدل شده است زیرا به دانشمندان اجازه می دهد درک عمیق تری از نقش آپوپتوز در بیماری ها داشته و به آنها در ایجاد درمان های جدید مبتنی بر آپوپتوز کمک کنند.

در حالی که ارزیابی ریخت شناسی به عنوان روش استاندارد برای شناسایی و تعیین کمیت آپوپتوز ظاهر شده است ، رنگ آمیزی TUNEL همچنان یک گزینه قابل اعتماد و قابل اطمینان است که فواید بسیاری دارد.

به عنوان مثال ، روش TUNEL می تواند سریعتر از گزینه های دیگر باشد و بسته به پروتکل مورد استفاده ، گاهی اوقات حساسیت بیشتری نیز دارد. بعلاوه ، از آنجا که رنگ آمیزی TUNEL شکستگی DNA را بررسی می کند که در اوایل آپوپتوز اتفاق می افتد ، می تواند سلولهای آپوپتوز را قبل از ارزیابی مورفولوژیکی شناسایی کند.

اصول رنگ آمیزی TUNEL

روش رنگ آمیزی TUNEL از فعالیت آنزیم ترانسفراز deoxynucleotide ترمینال (TdT) بهره میبرد. برای انجام پروتکل از ابتدا تا انتها حدود یک تا دو ساعت طول می کشد ، با این حال ، این زمان مورد نیاز برای آماده سازی بافت یا کشت سلول را شامل نمی شود.

در این فرآیند TdT دی اکسینوکلئوتیدها را به انتهای 3′-هیدروکسیل قطعات DNA اضافه می کند که در مرحله نهایی آپوپتوز شکسته می شوند. سلولهای خاصی از سیستم ایمنی TdT را بیان می کنند ، که در طول ترکیب مجدد V (D) J فعال است.

رنگ آمیزی TUNEL از یک لیبل فلورسنت یا شیمیایی استفاده می کند و به نوکلئوتیدهایی متصل می شود که توسط TdT به انتهای 3′-هیدروکسیل شکاف DNA اضافه شده اند. مطالعات به این نتیجه رسیده اند که روش TUNEL حساس تر از روش in situ nick translation assay (ISNT) است زیرا باعث ایجاد لیبل های بیشتری از سلولهای آپوپتوز می شود.

انواع رنگ آمیزی TUNEL

میکروسکوپ نوری اغلب برای تجزیه و تحلیل داده های تولید شده توسط رنگ آمیزی TUNEL استفاده می شود ، همچنین فلوسیتومتری نیز می تواند برای تجزیه و تحلیل رنگ آمیزی TUNEL فلورسنت استفاده شود.

سه روش اصلی در تکنیک های رنگ آمیزی TUNEL استفاده می شود ، روش اول آمیختن یک نوکلئوتید به یک رنگ فلورسنت است که معمولاً این روش FITC است. روش دوم جایی است که نوکلئوتیدهای دارای برچسب بیوتین توسط استرپتاویدین-HRP متصل می شوند و با فرمی از یک سوبسترا HRP کروموژنیک ، معمولاً DAB ، شناسایی می شوند که نوکلئوتیدهای متصل شده را به رنگ قهوه ای تبدیل می کند تا به راحتی قابل مشاهده باشند.

در تکنیک نهایی ، نوکلئوتیدهای دارای digoxygenin-، برومو یا FITC به آنتی بادی های خاص متصل می شوند ، که یا یک رنگ فلورسنت یا یک آنزیم برای تشخیص کروموژنیک برچسب گذاری کرده است.

کاربردهای رنگ آمیزی TUNEL

کشف بیشتر در مورد چگونگی عملکرد آپوپتوز ، به دلیل نقش اساسی آن در بیماری ، برای تحقیق و توسعه رویکردهای بالینی جدید برای بسیاری از بیماری ها و اختلالات حیاتی شده است.

شرایطی از جمله بیماری های نورودژنراتیو ، مانند بیماری پارکینسون ، بیماری آلزایمر ، اسکلروز جانبی آمیوتروفیک ، آسیب ایسکمیک پس از سکته ، خونرسانی مجدد و سکته قلبی ، و همچنین بیماری های خود ایمنی مانند هپاتیت ، graft versus host disease و ایدز همه افزایش میزان آپوپتوز را دارند که از ویژگی های این بیماری ها محسوب می شود. علاوه بر این ، مشخص شده است که کاهش آپوپتوز یکی از مشخصه های  اختلالات خود ایمنی مانند لوپوس سیستمیک و برخی از عفونت های ویروسی است.

رنگ آمیزی تونل برای افزایش دانش در مورد آپوپتوز در این بیماری ها اساسی بوده است. به عنوان مثال ، در تحقیقاتی که هدف آن بررسی ماهیت آپوپتوز در بیماری آلزایمر است مهم بوده است.

رنگ آمیزی TUNEL به دانشمندان کمک کرد تا تأیید کنند که از دست دادن سلول های عصبی اولیه و پاسخ گلیایی که مشخصه AD است مربوط به آپوپتوز است.

رنگ آمیزی TUNEL به عنوان یک روش قابل اعتماد برای شناسایی آپوپتوز در مطالعات بیشماری در AD مورد استفاده قرار گرفته است ، به محققان این امکان را می دهد تا مغز جمعیت سالم را در مقایسه با مبتلایان به AD مقایسه کنند تا تفاوت قابل توجهی در رفتار آپوپتوز بین این دو مشخص شود.

به همین ترتیب ، رنگ آمیزی TUNEL در پیشرفت درک ما از نحوه بروز آپوپتوز در بیماری پارکینسون (PD) اثبات شده است. این در مطالعاتی استفاده شده است که نشان می دهد آپوپتوز به احتمال زیاد یک مکانیسم حیاتی مرگ سلول در PD است ، برجسته است که آن یکی از اصلی ترین دلایل مرگ عصبی نیگرال است که مشخصه PD است.

علاوه بر این ، رنگ آمیزی TUNEL فعالیت تأثیرگذار آپوپتوز در عفونت هایی مانند هاری و هرپس سیمپلکس را کشف کرده و همچنین در اثبات ارزش درمانی درمان های جدید اکتشافی بسیار اساسی است.

رنگ آمیزی تونل نقش عمده ای در مطالعات مربوط به رابطه بین آپوپتوز و تمام بیماری های مرتبط برجسته شده در بالا داشته است. این احتمال وجود دارد که همچنان برای کشف آسیب شناسی و کمک به نوآوری در درمان های موثرتر که آپوپتوز غیرطبیعی را هدف قرار می دهند ، مورد استفاده قرار گیرد.

در آینده ، می توان انتظار داشت که در نتیجه تحقیقاتی که به روش رنگ آمیزی TUNEL متکی بوده است ، گزینه های درمانی جدیدی برای بیماری های مرتبط با آپوپتوز پدیدار شود.

همچنین بخوانید…

آزمایشگاه کشت سلول ژنیران

دوره کارآموزی کشت سلول ژنیران

خدمات کشت سلول آزمایشگاه ژنیران

بازید مجازی از ژنیران