تکنیک ها
پاساژ سلولی یا ساب کالچر
پاساژ سلولی یا ساب کالچر
در زیست شناسی، ساب کالچر یا پاساژ سلولی، به سلول یا کشت میکروبیولوژیکی جدیدی گفته می شود که با انتقال تمام یا گروهی از سلول ها از یک کشت قدیمی به یک محیط کشت تازه، ایجاد می شود. ساب کالچر به منظور افزایش عمر، افزایش تعداد سلول ها یا میکروارگانیسم ها در کشت استفاده می شود.
به دلیل افزایش تدریجی متابولیت های سمی، تمام شدن مواد مغذی محیط و یا افزایش تعداد سلول ها به دلیل رشد، نمی توان رده های سلولی و میکروارگانیسم ها را به طور نامحدود در یک محیط کشت نگه داشت. بنابراین از تکنیک ساب کالچر یا همان پاساژ سلولی برای تولید یک کشت جدید با تراکم کمتری از سلول ها نسبت به کشت اولیه استفاده می شود. این کشت جدید، حاوی مواد مغذی تازه و فاقد متابولیت های سمی است که امکان رشد مداوم سلول ها را بدون خطر مرگ سلول فراهم می کند. ساب کالچر هم برای سلول هایی با قدرت تکثیر بالا (به عنوان مثال میکروارگانیسمی مانند E. coli) و قدرت تکثیر کم (به عنوان مثال گلبول های سفید خون) کاربردی است.
به طور معمول، پاساژ سلولی از یک کشت با حجم مشخص به یک محیط رشد تازه با حجمی برابر حجم محیط اولیه است، این تکنیک، امکان حفظ طولانی مدت رده سلولی را فراهم می کند.
پروتکل پاساژ سلولی
پروتکل پاساژ سلول ها، به نوع سلول ها بستگی دارد.
سلول های غیر چسبنده
بسیاری از انواع سلول ها، به ویژه بسیاری از میکروارگانیسم ها، به صورت معلق رشد می کنند و به یک سطح متصل نیستند. این نوع سلول ها را می توان به سادگی با برداشتن حجم کمی از کشت اولیه و رقیق سازی آن در محیط کشت جدید، رشد داد.
سلول های چسبنده
سلول های چسبنده، مثل بسیاری از رده های سلولی پستانداران، به سطح فلاسک کشت متصل می شوند. این نوع سلول ها را قبل از پاساژ باید از سطح فلاسک جدا شوند. برای جدا کردن سلول های چسبنده می توان از یکی از روش های مختلف از جمله آنزیم تریپسین همراه با EDTA یا روش های مکانیکی مانند شستشوی مکرر یا استفاده از اسکراپر سلولی استفاده کرد. این سلول های جدا شده به صورت معلق در محیط رشد تازه قرار می گیرند تا مجددا به کف فلاسک متصل شوند.
همچنین بخوانید…
خدمات کشت سلول آزمایشگاه ژنیران
وقتی کشت خون مثبت شود مرحله که باید انجام بشه چی هست؟منظورم این هست باید رو محیط خاصی برده بشه،لطفا توضیح بدید
کشت خون رو برای بررسی وجود یا عدم وجود باکتریمی در خون انجام میدن
باکتریمی : یک وضعیت اورژانس محسوب میشه، اکثرا عفونتهای بیمارستانی یا ضعف سیستم ایمنی بدن افراد در مقابله اولیه با حجم بالایی از باکتری در خون، باعث ایجاد باکتریمی میشه. با کشت دادن بموقع خون میتونیم جلو سپتی سمی رو بگیریم،که اگر درمان نشه منجربه مرگ میشه . حالا بعد از کشت خون و انکوباسیون برا رشد انواع میکرواورگانیسمها یه بازه زمانی ۵ روزه در نظر میگیرن
چه اونایی که سریع رشد میکنن چه اونایی که کند رشد هستن مثل قارچها که زمان زیادی نیاز به رشد و بروز خودشون دارن.
حالا سوالی که ایجاد میشه این هست که ما چرا حضور یا عدم حضور قارچها رو هم زمان با باکتریها در خون بررسی میکنیم؟
چون هر میکرواورگانیسمی میتونه درصورت ورود به جریان خون عفونت ایجاد کنه. درصورت رشد هرگونه میکرواورگانیسمی در سطح محیط کشت شما میتونین در وهله اول با فرایند رنگ امیزی گرم نوع اون باکتری رو از نظر گرم منفی یا مثبت بودن تعیین کنید بعد با تهیه محیط کشت اختصاصی اون دسته از باکتریها اونها رو بطور اختصاصی جدا سازی کنید
با رنگ امیزی تعیین میکنید که این عفونت ناشی از باکتریهای گرم مثبت ویا منفیه. درعین حال چون باکتریهایی که بصورت فلور بر روی سطح پوست ما و یا داخل مجاری تنفسی یا گاها مخاط بدن زندگی میکنن
میتونن بعضی وقتها تهاجمی(فرصت طلب) عمل کرده و عامل ایجاد عفونت و حتی باکتریمی در خون بشن. در کنار تمام اینها شما میتونین همزمان که خون رو در محیطهای enrichment تلقیح و انکوبه کردین وبه ریکاوری و تجدید حیات برخی میکرواورگانیسمها کمک کردین با کشت سطحی وانتقال مایع تلقیح شده و انکوبه شده
به سطح محیط کشت نیمه اختصاصی دیسکهای انتی بیوگرام رو هم بر روی سطح محیط کشت قرار بدین تا زمان رو برا تجویز دارو برای پزشک از دست ندین.