نحوه بررسی زنده مانی سلول ها با روش تریپان بلو

نحوه بررسی زنده مانی سلول ها با روش تریپان بلو

برای بررسی تعداد سلول های زنده موجود در سوسپانسیون سلولی، از رنگ Trypan Blue استفاده می شود. اساس کار بر این است که سلول های زنده، غشای سلولی دست نخورده ای دارند که اجازه ی ورود رنگ های خاصی مانند تریپان بلو، ائوزین یا پروپیدیوم به داخل سلول را نمی دهد، در حالی که سلول های مرده چنین نیستند. هنگامی که سوسپانسیون سلولی با رنگ مخلوط شده و سپس به صورت چشمی با میکروسکوپ مورد بررسی قرار می گیرد، سلول های رنگ گرفته و بی رنگ مشاهده می شوند. یک سلول زنده یک سیتوپلاسم بی رنگی خواهد داشت در حالی که یک سلول غیر زنده یک سیتوپلاسم آبی رنگ خواهد داشت. بررسی زنده ماندی دوره ای سلول، شاخص اولیه تعیین کیفیت سلول ها، قبل از فرآیند انجماد است. زنده مانی  بیشتر یا برابر 95٪، برای تهییه فریز سلولی بسیار عالی است.

وسایل مورد نیاز

• سمپلر و سر سمپلر
• تریپان بلو
• لام هموسیتومتر و لامل
• کرایوویال
• میکروسکوپ

روش انجام کار

(1) 50 میکرولیتر سوسپانسیون سلولی را در یک ویال قرار دهید.

(2) به نسبت مساوی از رنگ تریپان بلو 0.4 درصد به سوسپانسیون سلول اضافه کنید تا رقت 1 به 2 بدست آید (به عنوان مثال: 50 میکرولیتر سلول به 50 میکرولیتر تریپان بلو) و با پیپت آن را کاملا سوسپانس کنید.

 (4) لامل را بر روی لام قرار دهید و با قرار دادن نوک پیپت در شکاف لام، مخلوط رنگ و سلول ها را در شکاف می ریزیم به نحوی که کامل زیر لام پخش شود.

(5) هماسیتومتر را زیر میکروسکوپ نوری قرار داده و سلول ها را شمارش می کنیم.

(6) هر طرف هماسیتومتر دارای چندین مربع است. تمام سلول ها (بی رنگ و آبی) را در هر مربع بزرگ در هر گوشه از هماسیتومتر بشمارید. هر مربع بزرگ شامل 16 مربع کوچک است. سلول ها ممکن است بر اضلاع مربع مماس باشند که بر اساس قرار داد، فقط سلول هایی را می شماریم که به ضلع بالایی و سمت چپ مماس باشند. سلول های آبی، مرده و سلول های بی رنگ، زنده هستند.

(7) درصد سلولهای زنده را با تقسیم تعداد سلولهای زنده بر تعداد سلولهای کل و ضرب در 100 محاسبه کنید.

همچنین بخوانید…

آزمایشگاه کشت سلول ژنیران

دوره کارآموزی کشت سلول ژنیران

خدمات کشت سلول آزمایشگاه ژنیران

بازید مجازی از ژنیران