تکنیک ها
بررسی زنده مانی سلول ها به کمک رنگ آمیزی AO / PI
بررسی زنده مانی سلول ها به کمک رنگ آمیزی AO / PI
بررسی زنده مانی با رنگ آمیزی فلورسانس دوتایی به کمک رنگ های آکریدین نارنجی (AO) و پروپیدیوم یدید (PI) انجام می شود که برای آنالیز زنده ماندن سلول های بنیادی اولیه، مانند PBMC ها، سلول های طحال ها و سلول های بنیادی موجود در نمونه های حاوی بقایای سلولی و سلول های بدون هسته ناخواسته مانند گلبول های قرمز به کار می رود.
آکریدین نارنجی (AO) و پروپیدیوم یدید (PI) رنگ های هسته ای (دارای قابلیت اتصال به اسید نوکلئیک) هستند. AO هم در برابر سلول های زنده و هم برای سلول های مرده دارای قابلیت نفوذ پذیر است و با نور فلورسانت سبز تمام سلول های هسته دار را رنگ می کند. PI از طریق غشای آسیب دیده وارد سلول های مرده می شود و تمام سلول های هسته دار مرده را رنگ می کند و فلورسانت قرمز ایجاد کند. از آنجا که گلبول های قرمز خون پستانداران بالغ فاقد هسته هستند، فقط سلول های تک هسته ای زنده و مرده سیگنال فلورسنت تولید می کنند بنابراین نیازی به لیز گلبول های قرمز خون نیست.
همان طور که گفته شد، در رنگ آمیزی AO/PI، از هر سلولی دو عکس در فیلتر های آبی و سبز گرفته و نهایتا این دو عکس را باهم ترکیب می کنند. اگر در عکس ترکیب شده، سلولی فقط به رنگ سبز دیده شود نشان دهنده‌ی زنده بودن سلول (Viabile Cell) می باشد. اگر به رنگ قرمز دیده شود نشان دهنده‌ی نکروز شدن سلول (Necrotoc Cell) می باشد. اگر سلولی در فیلتر سبز رنگ قرمز را نشان دهد و همچنین در فیلتر قرمز رنگ سبز را از خود نشان دهد در ترکیب دو عکس به رنگ نارنجی در می آید که نشان دهنده سلول های آپوپتوز شده (Apoptotic Cell) می باشد.
همچنین بخوانید…
خدمات کشت سلول آزمایشگاه ژنیران
