انجام تست لوسیفراز

آزمایشگاه ژنیران در راستای تأیید ترنسفکشن در سلول های جانوری، خدمات تست لوسیفراز را در کمترین زمان و با نتایج دقیق ارائه می کند. انجام تست لوسیفراز با استفاده از بهترین مواد با برند های معتبر، زیرنظر اساتید مجرب و باتجربه انجام می پذیرد. در یک آزمایش انتقال ژن به درون سلول، لازم است که قدرت پروموتر مورد استفاده برای بیان ژن مورد ارزیابی کمی قرار بگیرد. از آنجایی که بازدهی پایین فرایند انتقال ژن یک چالش رایج در چنین آزمایشاتی است، ضروری است که ارزیابی مناسبی از کیفیت فرایند انتقال ژن به عمل بیاید. یکی از ارزیابی های دقیق کیفیت انتقال ژن، تست لوسیفراز است.

🔴 زمان تحویل: بسته به پروژه 🔴 نحوه محاسبه قیمت:

نحوه‌ی تحویل پروژه:

• نتایج ارزیابی اسپکتروفوتومتری بصورت کمی گزارش می شود (انجام تست لوسیفراز با استفاده از کیت تست لوسیفراز از برند های معتبر انجام می شود.).  

خدمات جانبی:

آزمایشگاه ژنیران با دربرداشتن تجهیزات و امکانات به روز در زمینه های کشت سلول، ژنتیک مولکولی و مهندسی ژنتیک و پروتئین خدمات جانبی در راستای تأیید قطعی انجام ترنسفکشن ارائه می کند. برای کسب اطلاعات بیشتر از خدمات دیگر آزمایشگاه ژنیران، موارد زیر کلیک کنید:

• سایر خدمات کشت سلول (انتقال ژن به سلول های یوکاریوتی)

• خدمات ژنتیک مولکولی (آزمایشات بیان ژن و Real-time PCR)

• خدمات مهندسی ژنتیک و پروتئین (وسترن بلات)

تجهیزات مربوط به انجام تست لوسیفراز:

در رابطه با تست لوسیفراز بیشتر بدانیم…

در یک آزمایش انتقال ژن به درون سلول، لازم است که قدرت پروموتر مورد استفاده برای بیان ژن مورد ارزیابی کمی قرار بگیرد. از آنجایی که بازدهی پایین فرایند انتقال ژن یک چالش رایج در چنین آزمایشاتی است، پروموتورهای عموما بصورت فیوز شده با یک ژن گزارشگر مورد استفاده قرار می گیرند.

میزان فعالیت پروتئین گزارشگر و یا فلورسانس آن، با میزان بیان mRNA ژن خارجی متناسب خواهد بود. یکی از رایج ترین گزارشگرهای مورد استفاده در آزمایشات انتقال ژن لوسیفراز کرم شب تاب Photinus pyralis است. این ژن یک آنزیم با وزن 61 کیلو دالتون کد می کند که در حضور ATP، اکسیژن و یون منیزیم دو ظرفیتی، مولکول لوسیفرین را اکسید می کند.

با اکسید شدن لوسیفرین یک نور فلورسنت تولید می شود که می توان شدت آن را اندازه گیری کرد. چنانچه در محیط این واکنش کوآنزیم A نیز وجود داشته باشد، تولید نور تداوم بیشتری خواهد داشت. این فرایند ارزیابی قدرت پروموتر در آزمایشات انتقال ژن، تست لوسیفراز(Luciferase assay) نامیده می شود.

برای انجام تست لوسیفراز می توان از کیت های تجاری مختلف ( به خصوص کیت های کمپانی Promega) استفاده کرد، با این وجود می توان محلول های مورد استفاده در آزمایش را بصورت دستی در آزمایشگاه تهیه کرد. ضروری است که در هر صورت آزمایش به خوبی بهینه سازی شود تا بتوان ارزیابی دقیقی از فرایند انتقال ژن حاصل کرد.

🔵کاربرد های تست لوسیفراز🔵

🔴مطالعات ژنومیکس و ترنسکریپتومیکس🔴

🔴مطالعات gene discovery🔴

اﺳﺘﺨﺮاج ﻟﻮﺳﯿﻔﺮاز:

اﺳﺘﺨﺮاج ﻟﻮﺳﯿﻔﺮاز ﻣﯽ ﺗﻮاﻧﺪ از ﻃﺮﯾﻖ ﻟﯿﺰ ﻣﮑﺎﻧﯿﮑﯽ و ﯾﺎ ﺑﻪ روش ﻟﯿﺰ ﺷﯿﻤﯿﺎﯾﯽ ﺻﻮرت ﭘﺬﯾﺮد:

ﻟﯿﺰ ﻣﮑﺎﻧﯿﮑﯽ: روش ﺳﻮﻧﯿﮑﺎﺳﯿﻮن ﻣﺘﺪاولﺗﺮﯾﻦ روش ﻟﯿﺰ ﻣﮑﺎﻧﯿﮑﯽ ﺟﻬﺖ ﺗﺨﺮﯾﺐ ﺳﻠﻮل اﺳﺖ ﻓﻘﻂ در ﻧﺘﯿﺠﻪ وارد ﮐﺮدن اﻧﺮژي زﯾﺎد ﺑﻪ ﻧﻤﻮﻧﻪ ﺣﺮارت ﺑﺎﻻﯾﯽ ﺗﻮﻟﯿﺪ ﻣﯽﮔﺮدد در ﻧﺘﯿﺠﻪ در ﻫﻨﮕﺎم اﺳﺘﻔﺎده از اﯾﻦ روش ﺑﺎﯾﺪ ﺑﻪ اﯾﻦ ﻧﮑﺘﻪ ﺗﻮﺟﻪ داﺷﺖ ﮐﻪ آﻧﺰﯾﻢ ﻟﻮﺳﯿﻔﺮاز ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ دﻣﺎ ﻧﺎﭘﺎﯾﺪار ﺑﻮده و ﺧﻨﮏ ﮐﺮدن ﻧﻤﻮﻧﻪ ﻣﯽﺗﻮاﻧﺪ ﺑﺮاي اﺳﺘﺨﺮاج ﻟﻮﺳﯿﻔﺮاز ﻣﻔﯿﺪ ﺑﻮده و ﻏﯿﺮ ﻓﻌﺎل ﺷﺪن آن را ﺗﺎ ﺣﺪ اﻣﮑﺎن ﮐﺎﻫﺶ دﻫﺪ.

کاربرد آنزیم لوسیفراز

آﻧﺰﯾﻢ ﻟﻮﺳﯿﻔﺮاز ﺑﻪ ﻃﻮر وﺳﯿﻌﯽ در زﯾﺴﺖ ﻓﻨﺎوري و زﯾﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﯽ ﺳﻠﻮﻟﯽ و ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ ﻣﻮرد اﺳﺘﻔﺎده ﻗﺮار ﻣﯽ ﮔﯿﺮد .ﻟﻮﺳﯿﻔﺮاز ﯾﮑﯽ از ﻣﻬﻤﺘﺮﯾﻦ آﻧﺰﯾﻢ ﻫﺎي ﺻﻨﻌﺘﯽ ﻣﯽ ﺑﺎﺷﺪ ﮐﻪ در ﺗﮑﻨﯿﮏ ﻫﺎي ﺗﺸﺨﯿﺼﯽ ﮔﺴﺘﺮده اي ﮐﺎرﺑﺮد دارد.

ﺗﻮﻟﯿﺪ ﻧﻮر ﺗﻮﺳﻂ آﻧﺰﯾﻢ ﻟﻮﺳﯿﻔﺮاز ﯾﮑﯽ از ﺣﺴﺎس ﺗﺮﯾﻦ اﺑﺰارﻫﺎي ﺗﺸﺨﯿﺺ ﻣﻘﺪار ATP در ﻟﻮﻣﯿﻨﻮﻣﺘﺮي ﻣﯽ ﺑﺎﺷﺪ ﮐﻪ از آن، ﺟﻬﺖ ﺗﺸﺨﯿﺺ آﻟﻮدﮔﯽ ﻫﺎي ﻣﯿﮑﺮوﺑﯽ، ﺗﻮاﻟﯽ ﯾﺎﺑﯽ DNA ﺑﻪ روش ﭘﯿﺮوﺳﮑﻮﻧﺴﯿﻨﮓ23 ، اﻧﺪازه ﮔﯿﺮي ﻣﯿﺰان زﯾﺴﺖ ﭘﺬﯾﺮي24، ارزﯾﺎﺑﯽ ﻓﺴﻔﺎﺗﺎزﻫﺎ، ﺗﻬﯿﻪ ﮐﯿﺖ ﻫﺎي ﺗﺸﺨﯿﺺ ﺳﺮﻃﺎن و زﯾﺴﺖ ﺣﺴﮕﺮﻫﺎ، ﺑﺮرﺳﯽ رواﺑﻂ ﺑﺮﻫﻤﮑﻨﺸﯽ و ﺗﺎﺧﻮردﮔﯽ ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻫﺎ، ﻏﺮﺑﺎل ﮔﺮي داروﻫﺎ، ﺳﻨﺠﺶ ﻫﺎي آﻧﺰﯾﻤﯽ و ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ژن ﮔﺰارﺷﮕﺮ ﻓﺮاوان ﮐﺎرﺑﺮد دارﻧﺪ.