انجام ترانسفورماسیون
در این مرحله محصول ligation برای ترانسفورم سلول competent مورد استفاده قرار می گیرد و بعد از ترانسفورم، محصول ترانسفورماسیون روی محیط کشت آگار آگار کشت داده می شود تا تک کلونی بدست بیاید. در نهایت از کلونی های بدست آمده، کلونی نوترکیب را انتخاب می کنیم.
آزمایشگاه ژنیران با هدف خدمت به دانشپژوهان و محققین عزیز و همچنین موسسات دانشبنیان و تحقیقاتی آماده انجام و ارائه انواع خدمات در زمینه کلونینگ و انجام واکنش ترانسفورماسیون برای انواع گونههای باکتریایی در کمترین زمان و قیمت ممکن میباشد. این آزمایشگاه به منظور دست یافتن به بهترین نتیجه از تجهیزات معتبر و عالی استفاده مینماید. از ویژگیهای خوب موسسه ژنیران، داشتن کادر مجرب و با تجربه است که با بکارگیری بهترین تجهیزات آماده خدمترسانی به شما عزیزان میباشد.
🔴 زمان تحویل: 7 روز کاری 🔴 نحوه محاسبه قیمت:برای اطلاع از قیمت با آزمایشگاه تماس بگیرید
نحوه تحویل پروژه:
واکنش ترانسفورماسیون با تجهیزات معتبر و مناسب در آزمایشگاه ژنیران انجام میگیرد و محصول آن در پلیت LB Agar تحویل داده میشود.
در رابطه با ترانسفورماسیون بیشتر بدانیم:
ترانسفورماسیون فرایندی است که یک ارگانیسم، DNA خارجی را بدست می آورد. ترانسفورماسیون می تواند از دو طریق اتفاق بیفتد: ترانسفورماسیون طبیعی و ترانسفورماسیون مصنوعی. ترانسفورماسیون طبیعی، جذب ترکیب DNA برهنه از محیط طبیعی سلول را توصیف می کند. ترانسفورماسیون مصنوعی طیف گسترده ای از روش های القای جذب DNA اگزوژن را در بر می گیرد.
در پروتکلهای کلونینگ، از ترانسفورماسیون مصنوعی برای معرفی DNA نوترکیب به باکتری میزبان استفاده می شود. متداول ترین روش ترانسفورماسیون مصنوعی باکتری ها شامل استفاده از کاتیون های دو ظرفیتی (به عنوان مثال کلرید کلسیم) برای افزایش نفوذپذیری غشای باکتری است و از این طریق احتمال دستیابی به DNA افزایش می یابد.
یکی دیگر از روش های ترانسفورماسیون تبدیل، الکتروپوریشن است که در آن سلول ها را با جریان الکتریکی شوک میدهند تا سوراخ هایی در غشای باکتری ایجاد شود. با استفاده از غشای سلولی که به تازگی به خطر افتاده است، DNA به داخل سیتوزول باکتری منتقل می شود.
صرف نظر از این که از کدام روش ترانسفورم استفاده می شود، رشد باکتری ها، امکان ترمیم سطح باکتری ها و انتخاب سلول های نوترکیب را میدهد و البته این در صورتی است که DNA تازه بدست آمده مقاومت آنتی بیوتیکی را برای سلول ایجاد کند.
🔵 روش کار🔵
ابتدا هفتاد میکرولیتر از کامپیتنت خود برداشته و به آرامی داخل تیوب ligation خود میریزیم. به مدت پنجاه دقیقه تیوب حاوی کامپیتنت و ligation را روی یخ انکوبه میکنیم. در ادامه بعد از انکوبه روی یخ به باکتری هشتاد ثانیه شوک حرارتی میدهیم با انکوباتور. بعد از شوک حرارتی، روی یخ به تیوب خود، یک میلی لیتر محیط کشت بدون آنتی بیوتیک اضافه میکنیم.
تیوب را به مدت یک ساعت در دمای سی و هفت درجه سانتیگراد انکوبه میکنیم. پس از یک ساعت در زیر هود پنجاه لاندا از محیطکشت حاوی باکتری ترانسفورم شده را بر روی پلیت حاوی LB Agar دارای آنتی بیوتیک تتراسایکلین به صورت چمنی رشد میدهیم. دور پلیت را با پارافین بسته و بمدت یک شبانه روز در انکوباتور 37 درجه سانتیگراد انکوبه میکنیم تا کلونیها رشد کنند.
🔵 کاربردها 🔵
گرفتن کلونی نوترکیب: بعد از Ligation و ساخت نوترکیب، هدف داشتن نوترکیب در سلول و گرفتن استوک است که با این روش به راحتی میتوان کلونی مورد نظر را در پلیت نگه داشت.
تجهیزات و دستگاههای مورد نیاز:
سمپلر هود کلاس یک بن ماری انکوباتور
مهم ترین مرحله در انتقال ژن به گیاه کدام مرحله است؟
انتقال ژن به گیاهان، فرایندی است که در آن یک یا چند ژن خاص از یک ارگانیسم به گیاه هدف منتقل میشوند تا خصوصیات مطلوبی را در آن گیاه ایجاد یا بهبود ببخشند. این فرایند شامل چندین مرحله کلیدی است، اما برخی از مراحل به ویژه حائز اهمیت هستند:
طراحی و انتخاب ژن مناسب: انتخاب ژن مناسب برای انتقال بسیار مهم است. ژن باید به گونهای انتخاب شود که بتواند خصوصیت مورد نظر را در گیاه هدف ایجاد یا بهبود ببخشد. همچنین، باید اطمینان حاصل شود که ژن میتواند در محیط سلولی گیاه به درستی بیان شود.
انتخاب روش انتقال ژن: مهمترین مرحله در فرایند انتقال ژن، انتخاب روش مناسب برای ورود ژن به سلولهای گیاهی است. دو روش رایج شامل استفاده از آگروباکتریوم تومفاسینس (Agrobacterium tumefaciens)، که یک باکتری طبیعی است که به طور طبیعی میتواند DNA را به سلولهای گیاهی منتقل کند، و روش “تیراندازی با ژن” (Gene Gun) یا بمباران ذرهای، که در آن DNA مستقیماً به سلولهای گیاهی تزریق میشود، میباشند. انتخاب روش بستگی به نوع گیاه هدف و ژن مورد نظر دارد.
انتگراسیون و بیان ژن: پس از ورود ژن به سلول گیاهی، باید اطمینان حاصل شود که ژن به درستی در ژنوم گیاه انتگره شده و میتواند به صورت موثر بیان شود. این مرحله نیازمند دقت بالایی است تا از بیان مناسب ژن در گیاه اطمینان حاصل شود.
انتخاب و تکثیر گیاهان تراریخت: پس از انتقال ژن، گیاهانی که به طور موفقیتآمیز ژن جدید را دریافت کردهاند، باید از بین سایر گیاهان شناسایی و انتخاب شوند. سپس، این گیاهان تراریخت برای تولید نسلهای بعدی که خصوصیات مطلوب را حفظ میکنند، تکثیر میشوند.
هر چند تمامی این مراحل در فرایند انتقال ژن اهمیت دارند، اما روش انتقال ژن و اطمینان از انتگراسیون و بیان موفقیتآمیز ژن در ژنوم گیاه هدف را میتوان از مهمترین چالشها و کلیدیترین جنبههای این فرایند دانست.