برای تولید DNA مکمل(Cdna) از RNA با رونوبسی معکوس انجام می گیرد. ترنسکریپتازهای معکوس (RT) از الگوی RNA و آغازگر مکمل RNA برای هدایت سنتز اولین رشته CDNA استفاده می کنند که می تواند مستقیما به عنوان الگو برای واکنش زنجیره ای پلیمراز PCR استفاده شود. این ترکیب رونویسی معکوس و RTPCR امکان تشخیص RNA های فراوان در یک نمونه و تولید CDNA مربوطه را فراهم می کند و در نتیجه شبیه سازی ژن ها را تسهیل می کند. برای این کار از آنزیم mmLV استفاده می شود. این آنزیم از نوعی ویروس موشی MOUSE MOLONEY LEUKEMIA VIROUS تلخیص می شود که در دمای بین 37 تا 42 درجه فعال می شود. آنزیم رونوشت بردار معکوس که منشا تروویروس است فعالیت اگزوریبونوکلئنازی دارد که هر دو جهت 3 به 5 و 5 به 3 می باشد که از این رونویسی برای واکنش QRT استفاده می شود و قادر به سنتز DNA از روی RNA است. در واقع RNA استخراج شده از نمونه (انسان،باکتری،ویروس ، گیاه ، حیوان و قارچ) در ابتدا بعد از یکدست سازی میزان OD مقدار 1 تا 5 نانوگرم RNA را برداشته سپس از کیت سنتز CDNA ، RANDOM HEXAMER که پرایمر های تصادفی A،T C و G که به صورت 6 تایی در کنار هم قرار گرفته اند و یا OLIGO DT به RNA اضافه می شود و در نهایت با حضور آنزیم رونوشت بردار معکوس و فعال کردن این آنزیم در دمای 37 درجه نوکلئوتید ها یکی یکی مقابل نوکلوئوتید مرتبط خود قرار گرفته و سپس رشته مکمل (CDNA) ساخته می شود که در آن از مهارکننده های RNA و بافر لودینگ جهت حفظ Ph مناسب فعالیت و DNTP نیز استفاده می شود. رشته DNA مکمل آماده استفاده در تکنیک زنجیره پلیمراز کیفی REALTIME PCR می باشد.
تفاوت مستر میکس سایبر گرین که برای تکنیک ریل تایم مورد استفاده قرار می گیرد و مستر میکسی که برای انجام تکنیک PCR مورد استفاده قرار می گیرد رنک فلورنس است که توسط دستگاه ریل تایم قابل تشخیص می باشد و می توان بیان ژن ها را به صورت کمی نشان دهد.این رنک فلورنس که سایبر گرین می باشد به رشته ژنومی حساس بوده و با اتصال به آن باعث خوانش دستگاه ریل تایم می شود که به سه شکل NOROX ، HIGHROX و LOWROX که از شرکت های معتبر در اروپا وارد شده است. این محصول برای 100 تست تهیه شده و حساس به نور می باشد که در صورت مجاورت قرار نگرفتن در نور در دمای -20 تا مدت ها قابل نگهداری می باشد و برای همه دستگاه های ریل تایم از جمله ABI – Light Clear – Roch – Long gene – Mie- illuminia -gentien و …
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.