به عنوان بررسی کمی میزان بیان ژنهای موجودات زنده استفاده میشود. به دلیل عدم بررسی سلول از نظر فنوتیپی در سطح DNA از این دستگاه برای بیان یک ژن در سطح RNA و یا Pro استفاده میشود. در این سیستم، ابتدا با استفاده از آنزیم رونوشت بردار معکوس (Reverse Transcriptase) مولکولهای RNA به DNA های مکمل (cDNA) تبدیل میشوند. پس از سنتز cDNA و آماده سازی نمونه برای پلیمریزه شدن، به نمونه DNA رنگی تحت عنوان سایبرگرین (SYBR Green) اضافه میشود. این رنگ دارای خاصیت فلورسانسی می باشد که موجب رنگ شدن DNA میشود. که در نتیجه با وجود خاصیت خود میتواند برای هر نمونه یک گراف تکثیر ترسیم کند. هر نقطه از گراف نشان دهنده میزان اتصال سایبر گرین به رشته DNA می باشد. و در نهایت به دستگاه متصل و به نمایش درآمده و به آستانه خود میرسد. این آستانه برای میزان بیان DNA در هر نمونه میباشد.
به دلیل این کاربرد، مقایساتی که به صورت کمی گزارش میشوند نسبت به گزارشات کیفی، ارزش بالاتری خواهد داشت.
1-رنگ فلورسانس SYBR Green چیست؟ / 3- دستگاههای ریل تایم PCR به صورت چند گانه هستند؟/ 2- پرایمرهای پروب / 4- انواع برند:
1-رنگی است که توانایی اتصال مولکولهای دو رشته ای DNA را دارد و با وجود این ماده دستگاه ریل تایم قادر است در انتهای هر چرخه توالی مقداری amplify شدن DNA را اندازه گیری و ارائه دهد. مسترمیکس سایبر گرین حاوی Mgcl2 ، dNTP، Rcl هات استارت تک (hotstsrt taq DNA) رنگ سایبر گرین بهینه شده می باشد.
2-Taq : از یک پروب اسیدنوکلئیک ساخته شده که به مولکول های quender, Reporter می باشد. این پروب توانایی اتصال به 5’ 3’ و 3’ 5’ DNA را دارد. در طی مراحل پروب تخریب شود. مولکول Reporter را آزاد کرده تا اجازه شناسایی فلورسانس بدهد.
4- شرکتهای متعددی در دنیا وجود دارند که دستگاه ریل تایم PCR با مدلها و طراحیهای مختلف تولید می کنند: مانند دستگاه ABI که ساخت آمریکا میباشد و اساس کار آن به صورت گرمادهی پلیتی می باشد.
دیگر برندهای مانند ABI مثل رُش (ROCH) ساخت کشور آلمان Langgene ساخت کشور چین و …..
شرکت کوربت که در حال حاضر توسط روتورژن آلمان تولید میشود که اساس آن به صورت گرمادهی نقطهای در روتور میباشد.
1-پرایمرها چگونه طراحی میشوند؟ در طی اتصال پرایمرها به دمای ذوب هر دو پرایمر R و F بستگی دارد. بدین معنا که باید مشابه باشد. از روش بلاست (BLAST) و سایر نرم افزارهای دیگر می توان پرایمر را طراحی نمود.
2-رنگ فلورسانس SYBR Green در دستگاه ریل تایم چه کار بروزی میتواند داشته باشد؟
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.