راهنمای خرید رده سلولی K-562

K-562 سلول های لنفوبلاست جدا شده از مغز استخوان یک بیمار مبتلا به لوسمی میلوژن مزمن 53 ساله است. رده سلولی K-562 به طور گسترده در تحقیقات مربوط به اختلالات سیستم ایمنی و ایمنی شناسی استفاده می شود.

سطح ایمنی زیستی: BSL1 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی ATCC رده سلولی K-562

جهت خرید یا مشاوره با ما تماس بگیرید

رویه تکمیل سفارشات

حجم فلاسک

صاف

شناسه محصول: نامعلوم دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های انسانی
ارگانیسم	انسان خردمند، انسان
نوع سلول	لنفوسیت B
مورفولوژی	لنفوبلاست
بافت	مغز استخوان
بیماری	لوسمی میلوئیدی مزمن
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی تحقیق در مورد اختلالات سیستم ایمنی ایمونولوژی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

استفاده در نظر گرفته شده

رده سلولی نیز میزبان ترانسفکشن مناسبی است

رده سلولی K-562 به عنوان یک هدف بسیار حساس در شرایط آزمایشگاهی برای سلولهای NK-Cell مورد استفاده گسترده قرار گرفته است. Pross, et al. برای تجزیه و تحلیل دقیق از جمله کمی سازی فعالیت سلول های NK

حجم فلاسک	T25, T75

خصوصیات

خصوصیات رشد	معلق
سن	53ساله
جنسیت	زن
نژاد	نامشخص
استخراج	خط سلولی پیوسته K-562 توسط Lozzio و Lozzio از پلورال افیوژن یک زن 53 ساله مبتلا به لوسمی میلوژن مزمن در بحران‌های بلاست نهایی ایجاد شد.
کاریوتایپ	کروموزوم تریپلوئید است که در جزء 2S در 4.2 درصد در حال وقوع است. پانزده مارکر (M1 و M (15 تقریبا در تمام متافازهای S رخ داده است. به ندرت، دیسنتریک غیر اختصاصی خود به خودی رخ داده است، مارکرهای ناپایدار نیز به ندرت دیده می شد.کروموزم X دیزومی و N9 پوچ است.
تومورزایی	بله، در موش های برهنه تومورها در عرض 21 روز 100 درصد موارد (5/5) در موش‌های برهنه تلقیح زیر جلدی با 10⁷ سلول ایجاد شدند.
بیان آنتی ژن	CD7 (25%)
حساسیت به ویروس	Human poliovirus 1 Feline leukemia virus Vesicular stomatitis virus
ایزوآنزیم ها	AK-1, 1 ES-D, 1 G6PD, B GLO-I, 2 Me-2, 0 PGM1, 0 PGM3, 1
ایزوتایپ	IgM
نظرات	جمعیت سلولی به عنوان بسیار تمایز نیافته و از سری گرانولوسیتی مشخص شده است. مطالعات انجام شده توسط اندرسون و همکاران بر روی خواص غشای سطحی به این نتیجه رسید که K-562 یک خط اریترولوسمی انسانی است. بلاست های K-562 سلول های بدخیم خونساز و چند پتانسیلی هستند که به طور خود به خود به اجداد قابل تشخیص سری اریتروسیتی، گرانولوسیتی و مونوسیتی تمایز می یابند. اثر القا کننده ها بر خطوط فرعی مشتق شده از رده سلولی اصلی K-562 توسط کوفلر و گلد بررسی شده است. مطالعات کاریولوژیکی روی خطوط فرعی مختلف K-562 به سه گروه (A,B,C) توسط Dimery و همکاران طبقه‌بندی شده‌اند. وقوع کروموزوم فیلادلفیا، با این حال، از فرکانس بسیار پایین تر بود. هیچ کدام در 15 متافاز بررسی شده شناسایی نشد. رده EBNA منفی است..

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی RPMI 1640

برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10%را به محیط پایه اضافه کنید.

درجه حرارت

37 درجه

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای 70- درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگهدارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7/0 تا 7/6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، %5 CO₂ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود g125 به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

کشت ها را می توان با افزودن یا جایگزینی محیط تازه حفظ کرد. کشت های جدید را با 10⁵×1 سلول زنده در میلی لیتر شروع کنید. زیر کشت در 10⁶ × 1 سلول در میلی لیتر.

تعویض محیط کشت : هر 2 تا 3 روز یک بار محیط تازه اضافه کنید

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول 0/25% تریپسین و 0/53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه).

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به ظروف کشت جدید اضافه کنید.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

تعویض محیط: هر 2 تا 3 روز

مواد برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO