راهنمای خرید رده سلولی HDF-1

فیبروبلاست پوستی اولیه؛ نرمال، انسان، بالغ HDF یک رده سلولی پوست با کاربردهای تحقیقاتی در پاسخ به عوامل بیماری‌زا، پیری پوست، بهبود زخم، انتقال ژن و بیماری‌های پوستی از جمله اسکلرودرمی است. هنگامی که در فیبروبلاست پایه مدیا همراه با اجزای کیت رشد فیبروبلاست رشد می‌کند، یک سیستم سلولی ایده‌آل برای تکثیر فیبروبلاست‌های پوستی در شرایط بدون سرم یا در شرایط کم سرم فراهم می‌کند.

سطح ایمنی زیستی: BSL1 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی Sigma رده سلولی HDF-1

جهت خرید یا مشاوره با ما تماس بگیرید

رویه تکمیل سفارشات

حجم فلاسک

شناسه محصول: نامعلوم دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های انسانی
ارگانیسم	انسان خردمند
نوع محصول	سلول اولیه
نوع سلول	فیبروبلاست
مورفولوژی	دوکی شکل
بافت	پوست
بیماری	لوسمی میلوئیدی حاد
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی سم شناسی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

استفاده در نظر گرفته شده

پاسخ به عوامل بیماری زا، پیری پوست، بهبود زخم، انتقال ژن، بیماری های پوستی (مانند اسکلرودرمی)؛ تحقیق/تست لوازم آرایشی

حجم فلاسک	T25, T75

خصوصیات

خصوصیات رشد	چسبنده
سن	بالغ
نژاد	Lot-specific
جنسیت	Lot-specific
نظرات	محیط بدون سرم از منحنی های رشد عالی و مورفولوژی طبیعی و همچنین شرایط آزمایشی بدون سرم (نه بدون حیوان) پشتیبانی می کند. وجود 2% سرم جنین گاوی در سرم فیبروبلاست Growth Kit-Low از رشد پربارتری در مقایسه با محیط بدون سرم پشتیبانی می کند.

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی: DMEM High glucose

برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10% را به محیط پایه اضافه کنید.

درجه حرارت

37 درجه

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای 70- درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگهدارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7/0 تا 7/6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، %5 CO₂ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود g125 به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

حجم ها برای یک فلاسک 75 سانتی متر مربع داده شده است. مقدار محیط تفکیک مورد نیاز را متناسب با ظروف کشت با اندازه های دیگر افزایش یا کاهش دهید.

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول 0/25% تریپسین و 0/53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه).

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به ظروف کشت جدید اضافه کنید.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

تعویض محیط: 2 بار در هفته

مواد برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO