راهنمای خرید رده سلولی Daudi

رده سلولی Daudi از لنفوبلاست های B جدا شده از خون محیطی یک مرد سیاه پوست، 16 ساله، بیمار مبتلا به لنفوم بورکیت در سال 1967 تشکیل شده است.

سطح ایمنی زیستی: BSL2 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی ATCC رده سلولی Daudi

جهت مشاوره با ما تماس بگیرید

رویه تکمیل سفارشات

حجم فلاسک

صاف

شناسه محصول: نامعلوم دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های انسانی
ارگانیسم	انسان خردمند، انسان
نوع سلول	لنفوسیت B
مورفولوژی	لنفوبلاست
بافت	خون محیطی
بیماری	لنفوم بورکیت
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی ایمنی شناسی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

استفاده در نظر گرفته شده

یک رده سلولی لنفوبلاست B است که به خوبی مشخص شده است که به طور گسترده در مطالعات مکانیسم های لوکموژنز به کار گرفته شده است. رده سلولی نیز میزبان ترانسفکشن مناسبی است

حجم فلاسک	T25, T75

خصوصیات

خصوصیات رشد	معلق
سن	16 ساله
جنسیت	مرد
نژاد	سیاه
استخراج	رده Daudi از یک مرد سیاهپوست 16 ساله مبتلا به لنفوم بورکیت توسط E. Klein و G. Klein در می 1967 مشتق شد.
کاریوتایپ	کاریوتایپ انسان (مرد) با تعداد 46. کاریوتیپ در 66 درصد سلول ها دیپلوئید و پایداراست. بی ثباتی سیتوژنتیک در مقالات برای برخی از رده های سلولی گزارش شده است.
تومورزایی	بله، در آگارز بله، در موش های برهنه
مارکرهای بیانی
حساسیت به ویروس	Human poliovirus 1 Feline leukemia virus Vesicular stomatitis virus
ایزوآنزیم ها	G6PD, B
ایزوتایپ	IgM
نظرات	سلول ها برای بتا-2 میکروگلوبولین منفی هستند. آنها برای EBNA، VCA و ایمونوگلوبولین سطحی (sIg+) مثبت هستند. این رده سلولی برای حضور توالی‌های DNA ویروسی EBV از طریق PCR مثبت است.

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی RPMI 1640 ،

برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10%را به محیط پایه اضافه کنید.

درجه حرارت

37 درجه

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای 70- درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگهدارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7/0 تا 7/6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، %5 CO₂ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود g125 به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

کشت ها را می توان با افزودن محیط تازه یا جایگزینی محیط حفظ کرد. روش دیگر، کشت ها را می توان با سانتریفیوژ و سپس سوسپانسیون مجدد در 10⁵× 5 تا 3سلول زنده در میلی لیتر ایجاد کرد.

فاصله زمانی: تراکم سلولی را بین 10⁵ ×3 و 10⁶ × 3 تا 2 سلول زنده در میلی لیتر حفظ کنید.

تعویض محیط کشت : هر 2 تا 3 روز یک بار محیط تازه اضافه کنید (بسته به تراکم سلولی)

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول 0/25% تریپسین و 0/53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه).

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به رگ های کشت جدید اضافه کنید.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

نسبت پاساژ: نسبت ساب کالچر 1:4 تا 1:8 توصیه می شود.

تعویض محیط: هر 2 تا 3 روز

مواد برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO