اطلاعات عمومی
DNA پلی مراز Pfu
DNA پلی مراز Pfu
اگرچه بیشتر افراد تصور می کنند Taq پلی مراز تنها آنزیم استاندارد و کاربردی در PCR است ، اما گزینه های دیگری نیز برای انتخاب آنزیم DNA پلیمراز وجود دارد. نوع آنزیم پلی مراز مورد استفاده، تأثیر قابل توجهی بر فرآیند PCR دارد ، به عنوان مثال بر میزان محصول ، خلوص آن و میزان صحت همانند سازی محصول رونویسی شده نقش بسزایی دارد. گاهی این موارد نام برده شده اهمیت کمتری دارند و فقط یک PCR سریع و در تست انجام شده مورد نیاز است. اما اگر این موارد اهمیت داشته باشد چندین گزینه دیگر برای انتخاب آنزیم وجود دارید.
DNA پلیمراز Pfu آنزیمی است که در آرکی های هایپرترموفیلیک Pyrococcus furiosus یافت می شود و مسئول همانند سازی از DNA ارگانیسم در حین تقسیم سلولی است. در محیط آزمایشگاهی، از Pfu برای تکثیر DNA در واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) استفاده می شود.
این یک DNA پلیمراز از خانواده B است. این آنزیم دارای یک فعالیت اگزونوکلئازی 3′-5′ مشابه RNase H است ، که مشابه DNA پلیمراز II است.
قابلیت تصحیح Pfu پلیمراز
DNA پلیمراز Pfu دارای قابلیت تحمل حرارتی و تصحیح است که باعث برتری آن نسبت به Taq DNA پلیمراز می شود. برخلاف DNA پلیمراز Taq ، DNA پلیمراز Pfu دارای فعالیت تصحیح اگزونوکلئازی 3′ به 5′ است ، به این معنی که همانطور که DNA از انتهای 5′ به 3′ ساخته می شود، با فعالیت اگزونوکلئازی آنزیم، بلافاصله نوکلئوتیدهای اشتباه در انتهای 3′ رشته DNA جدید حذف می شود. در نتیجه ، قطعات PCR تولید شده توسط پلیمراز Pfu خطاهای کمتری نسبت به قطعات PCR تولید شده توسط Taq خواهند داشت.
Pfu تجاری موجود در بازار به طور معمول منجر به خطای 1 در 1.3 میلیون جفت باز می شود. با این حال ، Pfu سرعت کند تری دارد و به طور معمول برای تکثیر 1 کیلو باز DNA در 72 درجه سانتیگراد به 1-2 دقیقه زمان در هر چرخه نیاز دارد.
از این رو استفاده از DNA پلیمراز Pfu در تکنیک هایی که به سنتز DNA با دقت بالاتر و خطای کمتری نیاز دارند ، نسبت به DNA پلیمرازTaq برتری و اولویت دارد. همچنین می توان از آنزیم به صورت ترکیبی با پلیمراز Taq استفاده کرد تا علاوه بر اینکه صحت کار توسط پلیمراز Pfu بالا می رود، سرعت فعالیت پلیمرازی نیز توسط پلیمراز Taq تامین می شود.
