DAPI یا 4′,6-diamidino-2-phenylindole ، یک رنگ فلورسنت است که به شدت به مناطق غنی از آدنین-تیمین در DNA متصل می شود. این رنگ در میکروسکوپ فلورسانس بسیار پرکاربرد است. از آنجا که DAPI می تواند از طریق یک غشای سلولی دست نخورده عبور کند ، می توان از آن برای رنگ آمیزی سلول های زنده و فیکس شده استفاده کرد، اگرچه در سلول های زنده با کارایی کمتری از غشا عبور می کند و به همین ترتیب میتوان از آن به عنوان یک نشانگر بررسی زنده مانی غشا استفاده کرد.
تاریخچه
DAPI برای اولین بار در سال 1971 در آزمایشگاه Otto Dann به عنگام جست و جو دارویی برای درمان تریپانوزومیازیس سنتز شد. اگرچه ، این دارو به عنوان یک دارو ناموفق بود ، تحقیقات بیشتر نشان داد که این ماده به شدت به DNA متصل می شود و هنگام اتصال خاصیت فلئورسنتی آن بیشتر می شود. همین امر منجر به استفاده از آن در شناسایی DNA میتوکندری شد و از DAPI به عنوان یک رنگ DNA فلورسنت استفاده شد.
ایجاد فلورسنت قوی هنگام اتصال به DNA منجر به انتخاب این رنگ برای رنگ آمیزی فلورسنت DNA به منظور تکنیک میکروسکوپی فلورسانس شد. در اواخر دهه 1970 از این ماده برای شناسایی DNA در گیاهان ، سلول های متازوآ و باکتری ها و ذرات ویروسی استفاده شد ، و رنگ آمیزی کمی DNA داخل سلولی نیز در سال 1977 صورت گرفت.
خواص فلورسانس
هنگامی که این ماده به DNA دو رشته ای متصل می شود ، حداکثر جذب را در طول موج 358 نانومتر (ماورابنفش) و حداکثر انتشار آن در 461 نانومتر (آبی) دارد. بنابراین ، برای میکروسکوپ فلورسانس ، DAPI با نور ماورا بنفش تهییج شده و از طریق فیلتر، آبی / فیروزه ای تشخیص داده می شود. دامنه انتشار نسبتاً گسترده است. DAPI به RNA نیز متصل می شود، هرچند که به شدت فلورسنت نیست. انتشار آن هنگام اتصال به RNA به حدود 500 نانومتر تغییر می کند.
انتشار آبی DAPI برای کاربرانی که می خواهند از چندین رنگ فلورسنت در یک نمونه استفاده کنند مناسب است. برخی تداخلات فلورسانسی بین DAPI و مولکول های فلورسنت سبز مانند فلورسئین و پروتئین سبز فلئورسنت (GFP) وجود دارد اما اثر آن کم است. علاوه بر کاربرد این ماده در تکنیک های میکروسکوپ فلورسنت ، DAPI همچنین برای برچسب گذاری سلول های سلول ه کاربرد دارد که به کمک آن می توان DNA آلوده به مایکوپلاسما یا ذرات ویروسی را شناسایی کرد. مایكوپلاسما یا ذرات ویروسی نشانه گذاری شده، در محیط کشت، پس از رنگ آمیزی توسط DAPI ، فلورسنت می شوند و به راحتی قابل تشخیص هستند.
سلول های زنده و سمیت
از این ماده می توان برای رنگ آمیزی سلول های فیکس شده استفاده کرد. غلظت DAPI مورد نیاز برای رنگ آمیزی سلول زنده معمولاً بسیار زیاد است بنابراین به ندرت برای سلول های زنده از این ماده استفاده می شود. این ماده در MSDS به عنوان یک ماده غیر سمی است و اگرچه هنوز اثبات نشده است که این ماده دارای جهش زایی بر روی باکتری E. coli است اما در اطلاعات تولید کننده آن، به عنوان یک جهش زا شناخته شده است. از آنجا که این یک ترکیب متصل شونده به DNA است ، احتمالاً اثرات سرطان زایی دارد و باید مراقبت های لازم و دفع محتاطانه آن به درستی انجام شود.
جایگزین های DAPI
سلول های اندوتلیال با DAPI (آبی) ، فالوئیدین (قرمز) و به کمک ایمونوفلورسانس از طریق آنتی بادی به ایزوتیوسیانات فلورسئینFITC (سبز) رنگ آمیزی می شوند.
رنگ های Hoechst نیز مشابه DAPI هستند و DNA را به رنگ فلورسنت آبی رنگ آمیزی م دارند همچنین ی کنند و هم با سلول های زنده و هم با سلول های فیکس شده سازگاری دارد ونیز می توان آن را با فیلتر متناسب با DAPI مشاهده کرد.
جهت خرید و یا استعلام قیمت با ما تماس بگیرید یا در واتسپ پیام بزارید
