محیط کشت Selenite F Broth: ترکیب، قاعده کلی، موارد استفاده، آماده سازی و تفسیر نتایج

مقدمه

سلنیت اف براث (Selenite F Broth) محیطی است که برای غنی‌سازی انتخابی گونه‌های سالمونلا (Salmonella) از نمونه‌های بالینی و غذایی استفاده می‌شود. این یک براث پپتون لاکتوز بافر (buffered Lactose Peptone Broth) است که سدیم بیسلنیت (Sodium Biselenite) به عنوان عامل انتخابی به آن اضافه می‌شود.

سلنیت اف براث (Selenite F Broth) توسط لیفسون (Leifson) ابداع شد، که نشان داد سلنیت برای کلیفرم‌ها (coliforms) و برخی گونه‌های میکروبی دیگر، مانند استرپتوکوک مدفوعی (fecal streptococci)، که در نمونه‌های مدفوع وجود دارد، بازدارنده است و بنابراین، در بازیابی گونه‌های سالمونلا (Salmonella) مفید است.

او دریافت که سویه‌های مهار شده در نهایت پیشرفت خواهند کرد، اما اگر پس از 8 تا 12 ساعت انکوباسیون (incubation) از براث غنی‌شده، خرده‌کشت‌هایی ساخته شود، جداسازی سالمونلا بدون رشد شدید بسیاری از اعضای فلور روده امکان‌پذیر است.

Fدر سلنیت F Broth به معنی fecal (مدفوع) است، زیرا بیشتر برای جداسازی سالمونلا و شیگلا (Salmonella and Shigella) از نمونه‌های مدفوع استفاده می‌شود.

ترکیب سلنیت اف براث (Selenite F Broth)

قاعده کلی سلنیت اف براث (Selenite F Broth)

هیدرولیز آنزیمی کازئین (Casein enzymic hydrolysate) مواد نیتروژن دار، ترکیبات کربنی و منابع ویتامین را فراهم می‌کند. لاکتوز (Lactose ) یک منبع کربوهیدرات است که PH محیط را حفظ می‌کند. سلنیت (Selenite ) با رشد باکتری‌ها کاهش می‌یابد و به صورت قلیایی تولید می‌شود. افزایش pH سمیت سلنیت را کاهش می‌دهد و منجر به رشد بیش از حد سایر باکتری‌ها می‌شود.

اسید تولید شده توسط باکتری‌ها به دلیل تخمیر لاکتوز (Lactose ) برای حفظ pH خنثی عمل می‌کند. فسفات سدیم (Sodium phosphate) ph ثابتی را حفظ می‌کند و همچنین سمیت سلنیت را کاهش می‌دهد. سلنیت سدیم (Sodium selenite) بسیاری از گونه‌های باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی از جمله انتروکوک‌ها (enterococci ) و کلیفرم‌ها (coliforms) را مهار می‌کند. براث را بیش از 24 ساعت انکوبه (incubate) نکنید زیرا اثر مهاری سلنیت پس از 6 تا 12 ساعت انکوباسیون (incubation) کاهش می‌یابد.

موارد استفاده از سلنیت اف براث (Selenite F Broth)

• سلنیت F براث (Selenite F Broth) به عنوان غنی‌سازی انتخابی برای کشت گونه‌های سالمونلا (Salmonella)  استفاده می‌شود.
• همچنین به عنوان یک محیط غنی‌کننده برای جداسازی برخی از گونه‌های شیگلا (Shigella) استفاده می‌شود.
• براث همچنین برای انتقال سویه‌های ویبریو کلرا (Vibrio cholerae) توصیه می‌شود، زیرا این موجودات می‌توانند 2 تا 5 روز در براث سلنیت سدیم (Sodium Selenite Broth ) زنده بمانند.

تهیه سلنیت اف براث (Selenite F Broth)

• 4 گرم پودر سلنیت سدیم (sodium selenite) را به آب مقطر/دیونیزه (distilled/deionized) اضافه کنید.
• 19گرم پودر باقیمانده را به محلول بالا اضافه کرده و حجم را به 1 لیتر برسانید.
• به آرامی حرارت دهید و به جوش بیاورید.
• در لوله‌های آزمایش استریل، حداقل به عمق 5 سانتی متر بریزید.
• در حمام آب جوش یا با فشار 0 psi در 100 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه استریل کنید.
• اتوکلاو (AUTOCLAVE) نکنید.
• قبل از استفاده تا دمای اتاق خنک شود.

تفسیر نتیجه در Selenite F Broth

پس از انکوباسیون (incubation)، رشد ارگانیسم‌ها را ثبت کرد که با رنگ کدر و تیره در محیط مشخص می‌شود.

• نتیجه مثبت: بی رنگ، رشد خوب.
• به عنوان مثال: سالمونلا تیفی موریوم، شیگلا سونئی، سالمونلا انتریتیدیس و غیره.
• نتیجه منفی: صورتی با رسوب صفرا، مهار شده یا بدون رشد.
• مثال: اشریشیا کلی، انتروکوکوس فکالیس و غیره (Escherichia coli, Enterococcus faecalis, )

محدودیت‌های سلنیت اف براث (Selenite F Broth)

1. سدیم هیدروژن سلنیت (سدیم بیسلنیت) (Sodium hydrogen selenite (Sodium biselenite)) عامل بسیار سمی، خورنده و باعث تراتوژنیسیته (teratogenicity) می‌شود. با دقت زیادی رسیدگی کنید در صورت تماس با پوست، فوراً با آب زیاد بشویید.
2. براث‌های غنی کننده نباید به عنوان تنها محیط جداسازی استفاده شوند. آنها باید همراه با محیط‌های انتخابی و غیرانتخابی برای افزایش احتمال جداسازی پاتوژن‌ها، به ویژه زمانی که ممکن است در تعداد کمی وجود داشته باشند، استفاده شوند.
3. به دلیل تنوع غذایی، برخی از سویه‌ها ممکن است با رشد ضعیفی مواجه شوند یا در این محیط رشد نکنند.

کنترل کیفیت در Selenite F Broth

کنترل مثبت: سالمونلا تیفی موریوم (Salmonella Typhimurium) ATCC® 14028. رشد خوب.

کنترل منفی: Escherichia coli ATCC® 25922. رشد مهار شده یا بدون رشد.

مرجع:

1. E&O Laboratories Ltd- Selenite F Broth (BM0360).
2. Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd.- Selenite F Broth, Base w|o Selenite (83179).
3. HiMedia Laboratories Pvt. Ltd.- Selenite Broth (Selenite F Broth) (Twin Pack) (M052).
4. Becton, Dickinson and Company, BBL- Selenite-F Broth (L007497).
5. Scharlab- Selenite Broth Base (02-598).
6. Acumedia Manufacturers, Inc.- SELENITE BROTH (7155).
7. Conda Lab- Sodium Selenite Broth (1222).
8. Titan Media- SELENITE F BROTH (TMV 389).
9. OXOID PRODUCT SPECIFICATION- SELENITE F BROTH (EB0213E).
10. Mast Diagnostics- Selenite F Broth

مطالعات بیشتر:

محیط کشت چیست؟

محیط کشت دکستروز آگار سیب زمینی (PDA) چیست؟

تست SXT: اصول، روش تست، کاربردها و تفسیر

منبع

مترجم: بهار کنعانی