رنگ آمیزی اسمیر واژینال در رت و موش کوچک آزمایشگاهی

فهرست مطالب نمایش

مقدمه ای بر رنگ آمیزی اسمیر واژینال

برخلاف انسان‌ها که چرخه قاعدگی دارند، جوندگان چرخه فحلی (سیکل استروس) کوتاهی دارند که حدود ۴ تا ۵ روز طول می‌کشد. پایش این چرخه برای تحقیقات در زیست‌شناسی تولید مثل، غدد درون‌ریز، سم‌شناسی، داروشناسی و مطالعات سرطان بسیار مهم است.

یکی از پرکاربردترین روش‌ها برای تعیین مرحله چرخه فحلی (سیکل استروس)، سیتولوژی اسمیر واژن است. این تکنیک شامل جمع‌آوری سلول‌های اپیتلیال واژن و به دنبال آن رنگ‌آمیزی و بررسی میکروسکوپی است. ترکیب و مورفولوژی این سلول‌ها در چهار مرحله چرخه فحلی (سیکل استروس) با الگویی قابل پیش‌بینی تغییر می‌کند:

پرواستروس: در این مرحله سلول های غالب سلول‌های اپیتلیال هسته‌دار هستند ، که نشان‌دهنده افزایش سطح استروژن است.
استروس: وجود سلول‌های سنگفرشی شاخی و بدون هسته، که نشان‌دهنده تخمک‌گذاری است.
مت‌استروس: مخلوطی از لکوسیت‌ها، سلول‌های شاخی و اپیتلیال.
دی‌استروس: غلبه لکوسیت‌ها، که نشان‌دهنده فاز لوتئال است.

سیتولوژی واژن به دلیل غیرتهاجمی بودن، ارزان بودن و تکرارپذیری مورد توجه است و آن را برای پایش روزانه حیوانات زنده مناسب می‌سازد. تکنیک‌های مختلف رنگ‌آمیزی مانند پاپانیکولائو، گیمسا و کریستال ویوله جهت بررسی سلول ها و تشخیص مراحل مختلف چرخه فحلی (سیکل استروس) مورد استفاده قرار می گیرند.

این روش نیاز به جمع‌آوری دقیق نمونه، تثبیت مناسب و تفسیر توسط فرد باتجربه برای جلوگیری از اشتباه و طبقه‌بندی نادرست دارد. برای مطالعات با دقت بالا، سیتولوژی واژن ممکن است با سنجش هورمون‌های سرم یا آنالیز بافت‌شناسی ترکیب شود.

به دلیل سادگی و تکرارپذیری، رنگ‌آمیزی اسمیر واژن همچنان یک تکنیک استاندارد طلایی برای پایش چرخه فحلی(سکیل استروس) در جوندگان آزمایشگاهی است.

مواد وتجهیزات مورد نیاز:

سواب پنبه‌ای استریل یا پیپت پلاستیکی
محلول نمکی بافر فسفات (PBS) یا محلول نمکی نرمال سالین
اسلایدهای میکروسکوپی شیشه‌ای
ماده‌ی تثبیت‌کننده (اتانول یا متانول ۹۵٪)
رنگ‌ها (معمولاً استفاده می‌شوند: رنگ پاپانیکولائو، گیمسا یا کریستال ویوله)
آب مقطر
میکروسکوپ

روش کار:

جمع آوری نمونه:

ابتدا رت یا موش آزمایشگاهی را به آرامی مهار کنید.
سپس با یک سواب پنبه ای استریل یا پیپت ترشحات واژینال را جمع کنید.
سپس نمونه جمع آوری شده را به یک لام شیشه ای منتقل کرده و گسترش تهیه کنید.

تثبیت نمونه

لام حاوی نمونه را در مجاورت هوا قرار میدهیم تا خشک شود و سپس 10 تا 15 دقیقه در اتانول/متانول 96درصد قرار می دهیم.
تثبیت مناسب، مورفولوژی سلول را حفظ کرده و از ایجاد آرتیفکت جلوگیری می‌کند.

انواع روش های رنگ آمیزی:

رنگ آمیزی پاپانیکولائو

اسمیر را با استفاده از غلظت‌های نزولی الکل، هیدراته کنید.
هسته‌ها را با هماتوکسیلین رنگ‌آمیزی کنید.
سیتوپلاسم را با OG-6 و EA-50 رنگ‌آمیزی متقابل کنید.
دهیدراته و مونت کنید.

رنگ آمیزی گیمسا:

با محلول رقیق شده گیمسا (به نسبت ۱ به ۲۰ در بافر) به مدت ۱۵ تا ۲۰ دقیقه رنگ‌آمیزی کنید.
به آرامی با آب مقطر بشویید
سپس اجازه دهید لام ها در مجاورت هوا خشک شوند و سپس مونت کنید.