تکنیک پاساژ سلولی

تکنیک پاساژ سلولی

سلول ها به دلیل نیازهای بیولوژیکی، به حضور مواد مغذی و انتشار مناسب گازها و … بعد از انجام تقسیم در ظروف کشت و ایجاد تراکم بالا نیاز دارند که به ظروف کشت دیگری منتقل شوند و فرآیند تقسیمشان را آنجا ادامه دهند. این کار به نسبت ۱ به ۲ انجام می شود یعنی سلول های یک ظرف به دو ظرف تقسیم و منتقل می شوند و به همین ترتیب پاساژ سلول ها را ادامه می دهیم.

به حالتی که سلول ها بعد از هربار تقسیم به ظرف جدیدی منتقل می شوند تا فرآیند تقسیم را ادامه دهند پاساژ می گویند.

شماره پاساژ در تکنیک پاساژ سلولی به چه معناست؟

انجام یک آزمایش سلولی خوب خواستار شروع با رده سلولی به پاساژ کم است اما یک شماره پاساژ خوب چیست؟ این تعداد در طول سالها متفاوت بوده است. بعضی از استانداردها تا 7 پاساژ را منطقی و مناسب می دانند. در همین حال، برخی از تولیدکنندگان کشت سلولی برای رده های دو پاساژ یا کمتر هزینه بیشتری می پردازند. به طور کلی، ATCC توصیه می کند که رده های سلولی باید حداکثر در 5 پاساژ اول باشند تا از آن ها در برنامه های کاربردی پزشکی و بیو دارویی استفاده شود.

اما چگونه باید سلولهای کافی و مناسب را برای کار خود مدیریت کنیم؟

همیشه باید در رده های مختلف سلولی در پاساژ های بالا به دنبال تغییر در فنوتیپ یا علائم دیگر تغییرات بیان ژن باشیم. مثلا ATCC می گوید رده های سلولی باید در پاساژ 5 ام باشند.

پروتکل:

1. در صورت آماده شدن، محتویات فلاسک مورد نظر را درون زباله تر ریخته و مراقب باشید که خطر آلودگی را با هر قطره ای افزایش ندهید.
2. با استفاده از تکنیک های ضد عفونی، PBS استریل به اندازه کافی را درون فلاسک بریزید تا سلول ها شسته شود و از هرگونه FBS در محیط کشت باقیمانده خلاص شوید. چندین بار این کار را تکرار کنید.
3. با استفاده از پیپت، به اندازه کافی تریپسین EDTA اضافه کنید تا سلولهای کف فلاسک را بپوشاند.
4. برای اطمینان از تماس تریپسین با تمام سلول ها، فلاسک را به آرامی بچرخانید. فلاسک را در انکوباتور 37 درجه سانتیگراد قرار دهید. رده های سلولی مختلف به زمان تریپسینیزه متفاوت نیاز دارند. برای جلوگیری از تریپسینیزاسیون بیش از حد که می تواند به سلولها آسیب وارد کند ، بررسی هر چند دقیقه یکبار فلاسک ها ضروری است.
5. به محض جدا شدن سلول ها مقداری از محیط کشت کامل را به داخل فلاسک اضافه کنید (FBS در این حالت باعث غیرفعال کردن تریپسین می شود).
6. پس از انجام سانتریفیوژ با سرعت 1500 دور بر دقیقه و به مدت 5 دقیقه، پلت سلولی را مشاهده کرده و مایع رویی را دور بریزید.
7. پلت سلولی را با محیط کشت کامل به حجم رسانده و با پیپتاژ معلق کنید.
8. محیط مورد نظر که حالا دارای سلول نیز است را به دو فلاسک انتقال داده و سپس در انکوباتور قرار دهید.

برای مطالعه سایر تکنیک آزمایشگاهی کلیک کنید.

برای مشاهده و ثبت نام دوره کارآموزی کشت سلولی اینجا کلیک کنید

برای سفارش خدمات به آزمایشگاه کشت سلول ژنیران اینجا کلیک کنید