تعریف تست هاپکینز کول
تست هاپکینز کول یک آزمایش خاص است که برای تشخیص حلقه ایندول (Indole) و در نتیجه شناسایی تریپتوفان (Tryptophan) در پروتئین‌ها استفاده می‌شود. این تست همچنین “تست اسید گلیوکسیلیک” (Glyoxylic acid test) نیز نامیده می‌شود، زیرا شناساگر این تست حاوی اسید گلیوکسیلیک است.
این آزمایش توسط Frederick Gowland Hopkins و Sydney W. Cole در سال 1901 هنگام تلاش در جهت کشف تریپتوفان، ابداع شد. تست هاپکینز کول بسیار شبیه به واکنش Adamkiewez بوده و اصول آن مشابه این تست می‌باشد. Rosenheim این تست را مورد نقد قرار داد و استدلال کرد که اسید گلیوکسیلیک استفاده شده در این تست می‌تواند به راحتی در دماهای بالا به فرمالدهید (Formaldehyde) و دی‌اکسید کربن تجزیه شود. استفاده از فرمالدهید برای تشخیص تریپتوفان توسط Rosenheim کشف شد.
تست هاپکینز کول یکی از واکنشهای رنگی است که برای تشخیص آمینو اسیدها یا پروتئین‌های خاص بر اساس ایجاد یک رنگ مشخص، استفاده می‌شود. این تست حلقه ایندول را که در اسید آمینه تریپتوفان یافت می‌شود، شناسایی و به نوبه خود به شناسایی پروتئین‌های حاوی تریپتوفان کمک می‌کند.
اهداف تست هاپکینز کول
- برای تشخیص وجود حلقه ایندول حاوی اسید آمینه در پروتئین‌ها.
- برای تشخیص وجود پروتئین‌های حاوی تریپتوفان.
اصول تست هاپکینز کول
این تست بر این اصل استوار است که با اضافه کردن یک لایه اسید سولفوریک غلیظ روی مخلوطی از پروتئین‌های حاوی تریپتوفان و شناساگر هاپکینز کول، یک حلقه بنفش رنگ در سطح محیط ایجاد می‌شود. اسید گلیوکسیلیک اضافه شده به نمونه، دو مولکول تریپتوفان را با اثر بر حلقه ایندول مولکول‌های تریپتوفان، ترکیب می‌کند.
ماده غلیظی که به این ترتیب تشکیل می‌شود، دهیدراته شده و رنگدانه‌‌های بنفش رنگ ایجاد می‌کند. رنگ ایجاد شده در این تست به خاطر گروه ایندول مولکول تریپتوفان است که با اکسیداسیون ناشی از گروه آلدئیدی (Aldehyde) اسید گلیوکسیلیک، به یک ترکیب رنگی تبدیل می‌شود. H2SO4 اضافه شده به شناساگر به تثبیت اسید گلیوکسیلیک و جلوگیری از تجزیه آن و آزاد شدن دی‌اکسید کربن کمک می‌کند.
واکنش
H2O + ترکیب بنفش رنگ → H2O + محصول غلیظ → تریپتوفان + اسید گلیوکسیلیک
نیازمندی‌ها
شناساگر
- شناساگر هاپکینز کول: اسید گلیوکسیلیک – می‌توان این اسید را با قرار دادن اسید استیک گلاسیال (Glacial acetic acid) در معرض نور خورشید برای چند روز، تهیه کرد.
- H2SO4 غلیظ
- نمونه: محلول اسید آمینه 0.1٪
لوزم مورد نیاز
- لوله‌های آزمایش
- پایه لوله آزمایش
- پیپت‍‌ها
روش تست هاپکینز کول
- در یک لوله آزمایش، 2 میلی‌لیتر اسید استیک گلاسیال در معرض نور و 2 میلی‌لیتر از مایع نمونه بریزید.
- به این ترکیب، H2SO4 غلیظ را در امتداد جداره لوله آزمایش که به حالت مایل نگه داشته شده، اضافه کنید. در این حالت دو لایه مجزای مایع، بدون این که با هم مخلوط شوند، تشکیل می‌شود. (توجه: دهانه لوله باید از صورت دور باشد، زیرا هنگام افزودن اسید سولفوریک باید مراقب باشیم.)
- لوله آزمایش را از نظر تشکیل یک حلقه رنگی در فصل مشترک دو لایه بررسی کنید.
نتیجه و تفسیر تست هاپکینز کول
- نتیجه مثبت: یک نتیجه مثبت با تشکیل یک حلقه بنفش رنگ در محل اتصال دو لایه نشان داده می‌شود. این امر نشان دهنده وجود پروتئین‌های حاوی تریپتوفان است.
- نتیجه منفی: یک نتیجه منفی با عدم تشکیل حلقه بنفش رنگ در لوله آزمایش نشان داده می‌شود. این امر نشان دهنده عدم وجود پروتئین‌های حاوی تریپتوفان است.
موارد استفاده از تست هاپکینز کول
- از این تست جهت شناسایی پروتئین‌ها و اسیدهای آمینه در یک نمونه استفاده می‌شود.
- این تست یک آزمایش ساده و آسان بوده که به شناسایی تریپتوفان از سایر اسیدهای آمینه کمک می‌کند.
محدودیت‌ها
- ترکیباتی مانند نیتریت‌ها (Nitrite)، کلرات‌ها (Chlorate)، نیترات‌ها (Nitrate) و کلریدهای (Chloride) اضافی از ایجاد محصول غلیظ جلوگیری می‌کنند.
همچنین بخوانید:
- تست مالونات (Malonate Test): اهداف، اصول، روش و نتایج
- تست نیتروپروساید (Nitroprusside Test): تعریف، اصول، روش، تفسیر نتایج و موارد استفاده
- تست نین هیدرین (Ninhydrin Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
- تست سلیوانف (Seliwanoff’s Test): تعریف، اصول، روش، نتایج و موارد استفاده
مترجم: صادق حسینی‌کیا
