اهداف تست مالونات
- این تست در بررسی توانایی ارگانیسم در استفاده از مالونات به عنوان تنها منبع کربن، به کار می‌رود.
- تست مالونات در ابتدا برای افتراق بین اشریشیا (Escherichia) که در محیط رشد نمی‌کند و انتروباکتر (Enterobacter) طراحی شد.
- امروزه استفاده از این تست به عنوان یک محیط کشت افتراقی گسترش یافته و جهت افتراق سایر اعضای انتروباکتریاسه (Enterobacteriaceae) نیز به کار می‌رود.
اصول تست مالونات
ارگانیسمی که به طور همزمان بتواند از مالونات سدیم (Sodium malonate) به عنوان منبع کربن و سولفات آمونیوم (Ammonium sulfate) به عنوان منبع نیتروژن خود استفاده کند، به دلیل تشکیل هیدروکسید سدیم (Sodium hydroxide)، خاصیت قلیایی ایجاد می‌کند. محیطی که جهت تست استفاده از مالونات به کار می‌رود، براث مالونات (Malonate broth) است.
این محیط حاوی نمک‌های معدنی، مالونات سدیم به عنوان منبع کربن و سولفات آمونیوم به عنوان منبع نیتروژن می‌باشد. نشانگر pH در محیط، بروموتیمول بلو بوده که در PH خنثی سبز، در pH اسیدی ( کمتر از 6) زرد و در pH قلیایی (باز (بیشتر از 7.6)) آبی می‌شود. ارگانیسم‌هایی که به طور همزمان از مالونات و سولفات آمونیوم استفاده می‌کنند، هیدروکسید سدیم تولید کرده و در نتیجه منجر به واکنش قلیایی شده و نشانگر را از رنگ سبز اولیه به آبی روشن یا آبی پروس (Prussian blue) تغییر می‌دهد.
ارگانیسم‌هایی که نمی‌توانند از مالونات و سولفات آمونیوم استفاده و دکستروز را تخمیر کنند، تغییر رنگی ایجاد نمی‌کنند. ارگانیسم‌هایی که مالونات منفی هستند اما دکستروز را تخمیر می‌کنند، به دلیل افزایش اسیدیته در محیط باعث ایجاد رنگ زرد می‌شوند.
محیط کشت مورد استفاده در تست مالونات
مالونات براث (1000 میلی‌لیتر)
| مالونات سدیم | 3 گرم |
| سولفات آمونیوم | 2 گرم |
| کلرید سدیم (Sodium Chloride) | 2 گرم |
| عصاره مخمر | 1 گرم |
| دی‌پتاسیم فسفات (Dipotassium Phosphate) | 0.6 گرم |
| مونوپتاسیم فسفات (Monopotassium Phosphate) | 0.4 گرم |
| دکستروز | 0.25 گرم |
| بروموتیمول بلو | 0.025 گرم |
pH نهایی در دمای 25 درجه سانتی‌گراد: 0.2± 6.7
روش انجام تست مالونات
- لوله آزمایش حاوی مالونات براث را با کشت خالص 18 تا 24 ساعته ارگانیسم، تلقیح کنید.
- لوله را با درپوشهای شل‌شده در دمای 35 درجه سانتی‌گراد به صورت هوازی به مدت 24 تا 48 ساعت انکوبه کنید.
- تغییر رنگ در محیط را بررسی کنید.
تفسیر نتایج تست مالونات
- تست مثبت: ایجاد رنگ آبی در محیط.
- تست منفی: محیط سبز مانده یا به دلیل تخمیر دکستروز زرد می‌شود.
محدودیت‌های تست مالونات
- ارگانیسم‌های مورد آزمایش باید از یک کشت خالص 18 تا 24 ساعته برداشته شوند.
- برخی از ارگانیسم‌های مالونات مثبت به میزان کمی خاصیت قلیایی ایجاد می‌کنند که در تفسیر نتیجه مشکل ایجاد می‌کند. نتایج مشکوک باید با یک لوله مالونات تلقیح نشده مقایسه شوند. هر اثری از رنگ آبی نشان دهنده مثبت بودن تست پس از 48 ساعت انکوباسیون است.
- عصاره مخمر و گلوکز برای تحریک رشد برخی از ارگانیسم‌های سالمونلا (Salmonella) مورد نیاز است، اما به طور کلی برای گونه‌های دیگر ضروری نیست.
همچنین بخوانید:
- تست کاهش نیتریت (Nitrite Reduction Test): اصول، روش، نتایج و محدودیت‌ها
- تست میلون (Millon’s Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
- تست نین هیدرین (Ninhydrin Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
- تست نیتروپروساید (Nitroprusside Test): تعریف، اصول، روش، تفسیر نتایج و موارد استفاده
مترجم: صادق حسینی‌کیا
