تعریف تست ساکاگوچی
تست ساکاگوچی به عنوان یک آزمایش بیوشیمیایی که شامل یک واکنش رنگ‌سنجی برای تشخیص و تعیین خصوصیات گروه‌های گوانیدینیم (Guanidinium) است، یک آزمایش کیفی بوده که برای شناسایی اسید آمینه آرژنین (Arginine) موجود در پروتئین یا به صورت آزاد، استفاده می‌شود. این تست توسط Shoyo Sakaguchi، دانشمند ژاپنی حوزه مواد غذایی، در سال 1925 کشف و به نام آن نامگذاری شد.
این تست یک آزمایش مخصوص شناسایی آرژنین است که در آن گروه گوانیدینیم آرژنین با 1-نفتول (1-naphthol) یا α-نفتول (α-naphthol) واکنش داده تا یک محصول رنگی تولید کند. این تست یک آزمایش کیفی است و به دلیل سرعت کند ایجاد رنگ و تخریب برخی از گروه‌های گوانیدینیم توسط شناساگر، تعیین خصوصیات آرژنین در این تست با مشکل مواجه می‌شود.
هدف تست ساکاگوچی
- برای تشخیص وجود آرژنین چه در شکل آزاد و چه در پروتئین.
اصول تست ساکاگوچی
اساس تست ساکاگوچی بر پایه واکنش بین ۱-نفتول و گروه‌های گوانیدینیم موجود در آرژنین در حضور یک عامل اکسید کننده است. مکانیسم دقیق این واکنش هنوز مشخص نیست. با این حال، واکنش منجر به ایجاد یک کمپلکس قرمز رنگ به دلیل تشکیل یک ساختار ایندول مانند (Indole) می‌شود. شناساگر ساکاگوچی از هیپوبرومیت سدیم (Sodium hypobromite) و 1-نفتول تشکیل شده است. هیپوبرومیت سدیم به عنوان یک عامل اکسید کننده عمل کرده و پیوند هیدروژنی بین دو مولکول آرژنین را تسهیل می‌کند.
نیازمندی‌ها
شناساگر
- شناساگر ساکاگوچی: 1-نفتول 1% در الکل با اضافه شدن چند قطره محلول هیپوبرومیت سدیم 10% یا همان آب برم (Bromine water).
- NaOH 40 درصد
- نمونه (0.1٪ آرژنین یا 0.1٪ کراتین)
تجهیزات مورد نیاز
- لوله‌های آزمایش
- پایه لوله آزمایش
- پیپت‌ها (Pipette)
روش تست ساکاگوچی
- حدود 3 میلی‌لیتر از محلول تستی در یک لوله آزمایش بریزید و 1 میلی‌لیتر NaOH 40 درصد به آن اضافه و کاملا مخلوط کنید.
- سپس دو قطره 1-نفتول را به همان لوله آزمایش اضافه کرده و کاملا مخلوط کنید.
- اکنون 4 تا 5 قطره از هیپوبرومیت سدیم10 درصد یا همان آب برم اضافه کنید.
- لوله آزمایش را از نظر ایجاد رنگ بررسی کنید.
نتایج و تفسیر تست ساکاگوچی
- نتیجه مثبت: نتیجه مثبت در تست ساکاگوچی با تشکیل رنگ قرمز اثبات می‌شود. این امر نشان دهنده وجود آرژنین یا یک ترکیب گوانیدینیم است.
- نتیجه منفی: نتیجه منفی در تست ساکاگوچی با عدم وجود رنگ قرمز بیان می‌شود. این امر نشان دهنده عدم وجود آرژنین یا یک ترکیب گوانیدینیم است.
کاربردهای تست ساکاگوچی
- تست ساکاگوچی یک آزمایش بیوشیمیایی برای تشخیص وجود آرژنین به شکل آزاد یا ترکیبی در پروتئین‌ها، میباشد.
- این تست یک آزمایش کیفی است، اما می‌توان با افزودن اوره (که محصول رنگی را تثبیت می‌کند)، آن را کمی کرد.
محدودیتها
- آنالیز کمی محصول رنگی با این تست امکان پذیر نیست، زیرا سرعت واکنش ساکاگوچی کند است.
- به طور مشابه، برخی از گروه‌های گوانیدینیم موجود در محلول ممکن است توسط هیپوکلریت (Hypochlorite) از بین بروند و تفسیر نتایج تست را با مشکل مواجه سازد.
مطالب مرتبط:
- تست سلیوانف (Seliwanoff’s Test): تعریف، اصول، روش، نتایج و موارد استفاده
- تست ارلیخ (Ehrlich Test): تعریف، اصول، روش، نتایج و موارد استفاده
- تست آنترون (Anthrone Test): تعریف، اصول، روش، نتایج و موارد استفاده
- تست دیسک بوتیرات (Butyrate Disk Test): اصول، روش، نتایج، کاربردها و محدودیتها
- تست تالنز (Tollen’s Test): تعریف، اصول، روش، نتایج و موارد استفاده
مترجم: صادق حسینی‌کیا
