آگار VRBL چیست؟ ترکیبات، اصول، طرز تهیه و تفسیر نتایج

آگار VRBL چیست؟

آگار VRBL (آگار لاکتوز صفراوی قرمز بنفش) یا Violet red bile lactose agar یک محیط انتخابی برای جداسازی، تشخیص و شمارش باکتری‌های تخمیر کننده لاکتوز و تمایز کلیفرم‌ها یا گروه کلی آئروژنز از ارگانیسم‌های تخمیر کننده بدون لاکتوز در آب، شیر و سایر محصولات لبنی، تجهیزات لبنی و سایر مواد غذایی است.

کلیفرم‌ها باسیل‌های گرم منفی، غیر اسپور، اکسیداز منفی، هوازی یا غیر‌هوازی هستند که می‌توانند در حضور نمک‌های صفراوی یا سایر عوامل سطحی که می‌توانند لاکتوز را به سرعت تخمیر کنند تکثیر شوند و معمولا در عرض 24 ساعت یا 48 ساعت در دمای 44 ± 0.5 درجه سانتیگراد، اسید و گاز تولید کنند.

طبق گزارش سازمان بین‌المللی استاندارد ISO، کلیفرم‌های مدفوعی به عنوان کلیفرم‌های مقاوم به حرارت نیز شناخته می‌شوند.

ترکیبات VRBL آگار

محیط‌های آماده شده را در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد نگهداری کنید و از آن در برابر نور مستقیم خورشید محافظت کنید. پودر خشک شده را در یک مکان خشک و خنک در ظروف یا بطری‌های محکم در بسته در دمای 15 تا 25 درجه سانتیگراد نگهداری کنید تا از رطوبت و نور محافظت شود. پس از باز کردن و تعویض درپوش، تعویض درپوش، ظرف را در مکانی با رطوبت کم و در همان دمای نگهداری، نگهداری کنید.

تاریخ انقضا روی بسته یا ظرف است. اگر محیط کم آب شده آزادانه جریان ندارد یا ظاهر آن از رنگ اصلی خود تغییر کرده است، آن را دور بیندازید.

اصل آگار VRBL

• آگار VRBL که حاوی نمک‌های صفراوی و کریستال بنفش است، بر اساس MacConkey Agar ساخته شده است. لازم نیست از آن برای تشخیص بیماری یا دیگر شرایط در انسان‌ها استفاده شود.
• پپتون منبع نیتروژن، ویتامین‌ها، مواد معدنی و اسیدهای آمینه ضروری برای رشد است.
• عصاره مخمر منبع ویتامین‌هاست، مخصوصا ویتامین‌های گروه B.
• لاکتوز یک قند یا کربوهیدرات قابل تخمیر است که به تامین کربن و انرژی کمک می‌کند.
• نمک‌های صفراوی و Crystal Violet (کریستال ویولت) بازدارنده‌ی باکتری‌های غیر هدفمند گرم مثبت و برخی باکتری‌های گرم منفی هستند.
• قرمز خنثی یک نشانگر pH است که pH را تغییر می‌دهد ، که به دلیل تولید اسید در هنگام تخمیر ، قرمز خنثی را به رنگ قرمز بنفش تغییر می‌دهد.
• سدیم کلراید الکترولیت‌های ضروری را برای حمل و نقل و تعادل اسمزی فراهم می‌کند. آگار باکتریولوژیک عامل منجمدکننده است.
• میکروارگانیسم‌ها یا کلیفرم‌هایی که به سرعت لاکتوز را تخمیر می‌کنند ، کلنی‌های بنفش یا قرمز بنفش با رسوب نمک‌های صفراوی تولید می‌کنند که اغلب توسط هاله‌ای از همان رنگ ، قرمز-بنفش (در رابطه با اسیدی شدن قوی مرتبط با استفاده از لاکتوز) احاطه شده‌اند . تخمیرکننده‌های غیر لاکتوز و تخمیر کننده‌های لاکتوز دیررس کلنی‌های کم رنگ با قسمت‌هایی مایل به سبز تولید می‌کنند. گاهی اوقات، کوکسی‌های دستگاه گوارش می‌توانند کلنی‌های قرمز کوچک و نقطه‌ای شکل تشکیل دهند. قطر کلنی‌های قرمز-بنفش معمولا 0.5 میلی متر < است.
• گزینش‌پذیری می‌تواند با انکوباسیون بدون‌هوازی یا افزایش دمای بالای 42 درجه سانتیگراد به مدت 18 ساعت افزایش یابد، که ممکن است برای سرکوب رشد میکروارگانیسم‌های ناخواسته یا سایر باکتری‌های گرم-مثبت استفاده شود.

مشاهده ماکروسکوپی VRBL Agar

پس از انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 18-24 ساعت در شرایط بی‌هوازی، رنگ و رشد کلنی‌ها به شرح زیر است:

تهیه محیط کشت VRBL

• 38.5 گرم آگار VRBL را وزن کنید و آن را روی 1 لیتر آب تصفیه شده/مقطر قرار دهید. و صبر کنید تا 5 دقیقه جذب شود.
• آن را به آرامی با هم زدن مکرر، گرم کنید و آن را به درستی مخلوط کنید تا با جوشاندن چند ثانیه‌ای سوسپانسیون همگن به دست آید.

یادداشت: از اتوکلاو، استریل کردن یا گرم شدن بیش از حد خودداری کنید. آن را تا 45 درجه سانتیگراد خنک کنید.

در صورت لزوم ، pH 7.4 ± 0.2 را حفظ کنید.

و آن را در ظرف‌ها یا لوله‌های پتری استریل شده بریزید. ظاهر محیط بنفش روشن، بنفش، شفاف به نظر می رسد .

محیط را می‌توان تا 4 ساعت پس از آماده سازی استفاده کرد.

روش

1. روش ریختن یا پخش کردن پلیت را با روکش یا بدون روکش انجام دهید. (برای روش پلیت ریختن، محیط را تازه آماده کنید، تا دمای 47 درجه سانتیگراد معتدل کنید و ظرف 3 ساعت استفاده کنید.)
2. برای کلیفرم‌ها در دمای 37 درجه سانتیگراد یا 18-24 ساعت انکوبه کنید. سایکروتروف‌ها را در دمای 4 درجه سانتیگراد به مدت ده روز، مزوتروف‌ها را در دمای 32 درجه سانتیگراد به مدت 24-48 ساعت؛ ترموتروف‌ها را در دمای 42 درجه سانتیگراد به مدت 18 ساعت، برای اشریشیا کلی، در دمای 44 ± 0.1 درجه سانتیگراد انکوبه کنید. برای شمارش کلیفرم‌های مقاوم به حرارت، در دمای 44 ± 1 درجه سانتی گراد به مدت 24 ± 2 ساعت انکوبه کنید.
3. کلنی‌های بنفش یا قرمز/بنفش با هاله های قرمز/بنفش با قطر ≤0.5 میلی متر را بررسی کنید.
4. آزمایش‌های تأییدی کلنی‌های ارگانیسم معمولی را مطابق با استانداردهای قابل اجرا ادامه دهید.

تفسیر

• پس از انکوباسیون گروه‌های کلی آئروژن در دمای 35 یا 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت، کلنی‌های کلیفرم روی پتری پلیت‌ها باید شمارش شوند.
• کلیفرم کلنی‌های گرد ، بنفش یا قرمز بنفش با هاله‌های قرمز بنفش (انواع لاکتوز + ve) یا رنگ پریده با قسمت‌های مایل به سبز (انواع لاکتوز -ve) با قطر ≤ 0.5 میلی‌متر تشکیل می‌دهد.

موارد استفاده از آگار VRBL

• آگار VRBL برای بررسی مواد غذایی، خوراک دام و نمونه‌های محیطی از نظر وجود کلیفرم‌هایی که به عنوان یک زیر‌گروه در انتروباکتریاسه گنجانده شده‌اند، استفاده می‌شود.
• آگار VRBL برای شمارش کلیفرم‌های مدفوعی و کلیفرم‌های مقاوم به حرارت در غذاها استفاده می‌شود.

محدودیت‌های آگار VRBL

• برخی از گونه‌ها ممکن است به دلیل تغییرات در تغذیه ضعیف رشد کنند یا قادر به رشد در این محیط نباشند.
• در طول فرآیند پور پلیت، یکی از مشکلات تأثیر دمای بالا بر کلیفرم‌های تحت تنش است، بنابراین کلیفرم آگار مدفوعی (FCA) نیز می‌تواند برای بازیابی و شمارش کلیفرم مدفوعی تحت تنش استفاده شود.

اقدامات احتیاطی محیط کشت VRBL

• روپوش و دستکش آزمایشگاهی مناسب بپوشید. مواد شیمیایی و میکروارگانیسم‌های زنده عفونی (باکتری ها) را در حین کار در آزمایشگاه با دقت مدیریت کنید.
• طبق قوانین و مقررات محلی، م‌حیط‌هایی که با نمونه‌های مواد غذایی در تماس هستند، آلوده تلقی می‌شوند و باید به عنوان مواد آلوده دور ریخته شود.
• فاصله زمانی بین پایان تهیه محلول استوک (یا در مورد یک محصول جامد رقیق سازی 10 به توان 1- در نظر گرفته شود) و وقتی لحظه رقیق سازی ترکیب‌ها می‌رسد، تماس با محیط کشت نباید بیش از 15 دقیقه باشد.

جهت خرید و یا استعلام قیمت با ما تماس بگیرید یا در واتسپ پیام بزارید

02186073470

همچنین بخوانید:

• محیط کشت VRBA (ویولت رد بایل آگار): ترکیب، اصول، آماده‌سازی، نتایج و موارد استفاده
• باکتری های کلیفرم (Coliform): ویژگی‌ها، نمونه‌ها و روش شناسایی

مترجم: حنانه بریمانی

منبع