کروماتوگرافی ژل تراوایی: تعریف، اصل، اجزا، مراحل و کاربرد

فهرست مطالب نمایش

کروماتوگرافی ژل تراوایی چیست؟

کروماتوگرافی ژل تراوایی را فیلتراسیون ژل یا کروماتوگرافی حذف اندازه نیز می‌نامند.
در کروماتوگرافی حذف اندازه، فاز ساکن یک ماتریکس متخلخل است که از ترکیباتی مانند پلی استایرن متقاطع، دکستران شبه متقاطع، ژل‌های پلی آکریل آمید، ژل آگارز و غیره تشکیل شده است.
جداسازی بر اساس اندازه‌های مولکولی آنالیت انجام می‌شود زیرا ژل مانند یک غربال مولکولی رفتار می‌کند.
این تکنیک برای جداسازی پروتئین‌ها، پلی ساکاریدها، آنزیم‌ها و پلیمرهای مصنوعی استفاده می‌شود.
به عنوان یک تکنیک، کروماتوگرافی حذف اندازه برای اولین بار در سال 1955 توسط Lathe و Ruthven توسعه یافت.

تکنیکی است که در آن جداسازی اجزا بر اساس تفاوت وزن مولکولی یا اندازه است.
فاز ثابت مورد استفاده یک ماتریس پلیمری متخلخل است که منافذ آن کاملاً با حلال پر شده است تا به عنوان فاز متحرک مورد استفاده قرار گیرد.
مولکول‌های موجود در نمونه از طریق ستون‌های مخصوص حاوی مواد ریز متخلخل (ژل) پمپ می‌شوند.
اساس جداسازی این است که مولکول‌های بالاتر از اندازه معین به طور کامل از منافذ حذف می‌شوند، در حالی که مولکول‌های کوچکتر به طور جزئی یا کامل به داخل منافذ دسترسی دارند.
جریان فاز متحرک از این رو باعث می‌شود که مولکول‌های بزرگتر بدون نفوذ به ماتریس ژل بدون مانع از ستون عبور کنند، در حالی که مولکول‌های کوچکتر با توجه به نفوذشان به ژل کند می‌شوند.

از دانه‌های ژل پلیمری نیمه تراوایی و متخلخل با محدوده اندازه منافذ کاملاً مشخصی تشکیل شده است.

دارای خواص زیر است:

نمونه‌هایی از ژل:

A 1,3 linked β-D-galactose و 1,4 linked 3,6-anhydro-α, L-galactose

از مایعی تشکیل شده است که برای حل کردن مولکول‌های زیستی استفاده می‌شود تا فاز متحرک پاسخ تشخیص بالا را بدهد و سطح بسته‌بندی را مرطوب کند.

هر یک از انواع زیر ممکن است استفاده شود:

پمپ‌های سرنگی یا رفت و برگشتی با جریان بالا.

آشکارسازها ممکن است آشکارسازهای حساس به غلظت، آشکارسازهای خواص توده، آشکارسازهای ضریب شکست (RI) و غیره باشند.

شامل سه مرحله عمده است:

شامل:

تورم ژل
پک کردن مهره های ژل پلیمری متخلخل و نیمه تراوایی با محدوده مشخصی از اندازه منافذ.
شستشو: پس از پک کردن، چندین حجم ستونی از محلول بافر از ستون عبور داده می‌شود تا هرگونه حباب هوا از بین برود و همگنی ستون آزمایش شود.

تعداد محدودی از پیک‌ها در مقیاس زمانی کوتاه می‌توانند در GPC حل شوند.
قبل از استفاده از ابزار باید فیلتراسیون انجام شود تا از تخریب ستون‌ها و تداخل با آشکارسازها گرد و غبار و ذرات دیگر جلوگیری شود.
جرم مولکولی بیشتر زنجیره‌ها نزدیک به هم برای جداسازی GPC چیزی بیشتر از پیک‌های وسیع را نشان نمی‌دهد.

همچنین بخوانید: