تست MRS Broth: اصول، روش تهیه، موارد استفاده و تفسیر

مقدمه‌ای بر تست MRS Broth

فرمول MRS توسط De Man، Rogosa و Sharpe برای جایگزینی یک محصول متغیر (آب گوجه فرنگی) و در عین حال، فراهم کردن محیطی برای رشد خوب لاکتوباسیل‌ها به طور کلی توسعه داده شد. از این رو، MRS آگار و براث به دلیل برتری آنها معمولاً برای کشت و شناسایی باکتری‌های اسید لاکتیک به ویژه گونه های لاکتوباسیلوس (Lactobacillus) استفاده می‌شود.

“باکتری‌های اسید لاکتیک” شامل گونه‌هایی از جنس‌های زیر است: لاکتوباسیلوس، استرپتوکوک، پدیوکوکوس و لوکونوستوک (Lactobacillus, Streptococcus,Pediococcus and Leuconostoc.). همه این گونه‌ها می‌توانند اسید لاکتیک را در مقادیر قابل توجهی تولید کنند.

آنها گرم مثبت، کاتالاز و اکسیداز منفی هستند و در نیازهای غذایی خود سختگیر هستند. رشد به طور قابل توجهی توسط شرایط میکرو هوازی افزایش می‌یابد.

محیط MRS برای لاکتوباسیل‌ها انتخابی است اما ممکن است مقداری رشد لوکونوستوک و پدیوکوک (pediococci and leuconostocs) رخ دهد. انتخاب پذیری را می‌توان با تنظیم pH تغییر داد. لاکتوباسیل‌ها سطوح pH پایین‌تری را نسبت به استرپتوکوک‌ها (pH 5.0-6.5) تحمل می‌کنند و pediococci و leuconostocs در این محدوده بهترین رشد را دارند.

هدف تست MRS Broth

برای تعیین اینکه آیا یک موجود زنده در طی تخمیر گلوکز گاز تشکیل می‌دهد یا خیر.

اصول تست MRS Broth

براث MRS حاوی منابع کربن، نیتروژن و ویتامین‌ها برای حمایت از رشد لاکتوباسیل‌ها و سایر موجودات است. هضم آنزیمی بافت حیوانی، عصاره گوشت گاو و عصاره مخمر منابع کربن، نیتروژن و ویتامین هستند که برای برآوردن نیازهای رشد عمومی در لاکتوباسیل MRS براث استفاده می‌شوند. دکستروز کربوهیدرات قابل تخمیر است.

استات سدیم یک عامل بازدارنده است. استات سدیم و سیترات آمونیوم به عنوان عوامل انتخابی و همچنین منابع انرژی عمل می‌کنند. پتاسیم فسفات عامل بافر است. سولفات منیزیم و سولفات منگنز کاتیون‌های مورد استفاده در متابولیسم را فراهم می‌کنند. پلی سوربات 80 یک سورفکتانت است که جذب مواد مغذی توسط لاکتوباسیل‌ها را تسهیل می‌کند.

هنگامی که یک ارگانیسم به محیط براث تلقیح می‌شود، ارگانیسم‌هایی که قادر به تخمیر قند دکستروز هستند، بر عوامل انتخابی غلبه می‌کنند و از سایر مواد مغذی ارائه شده استفاده می‌کنند، در این شرایط رشد بسیار خوبی دارند که یک نتیجه مثبت در نظر گرفته می‌شود. برخی از ارگانیسم‌ها همچنین ممکن است قادر به تولید گاز باشند که ممکن است برای آن یک لوله دورهام قرار داده شود تا این تولیدکنندگان گاز را از بقیه موجودات متمایز کند (مثلاً Leuconostoc sp. از Lactobacillus spp.).

محیط‌های کشت

هضم آنزیمی بافت حیوانی (10 گرم)، عصاره گوشت گاو (10 گرم)، عصاره مخمر (5 گرم)، دکستروز (20 گرم)، NaC2H3O2 (5 گرم)، پلی سوربات 80 (1 گرم)، KH2PO4 (2 گرم)، آمونیوم سیترات (2 گرم)، MgSO4 (0.1 گرم)، MnSO4 (0.05 گرم)، در 1000 میلی لیتر، pH 6.5.

روش تهیه

• براث MRS را با کشت 18 تا 24 ساعته از آگار یا براث تلقیح کنید.
• 24 تا 48 ساعت در دمای 35-37 درجه سانتیگراد در هوای محیط انکوباسیون کنید.
• لوله آزمایش را از نظر تیرگی رنگ و تولید گاز بررسی کنید.

نتایج مورد انتظار تست MRS Broth

• مثبت: رشد با تیرگی مشخص در براث، تولید گاز که با حباب در لوله دورهام نشان داده شده است (Leuconostoc spp.) رشد منجر به تیرگی رنگ و عدم تولید گاز (لاکتوباسیلوس spp) می‌شود.
• منفی: بدون رشد (بدون کدورت) یا تولید گاز

موارد استفاده از تست MRS Broth

• برای شناسایی برخی گونه‌های لاکتوباسیلوس استفاده می‌شود.
• این آزمایش بخشی از آزمایش‌های تاییدی است که بر روی ارگانیسم‌های جدا شده روی MRS Agar انجام می‌شود.
• معمولا برای شناسایی لاکتوباسیل ها از حفره دهان، محصولات لبنی، غذاها، مدفوع و سایر منابع انجام می‌شود.

محدودیت‌های تست MRS Broth

• توصیه می‌شود برای شناسایی کامل آزمایشات بیوشیمیایی، ایمونولوژیکی، مولکولی یا طیف سنجی جرمی روی کلنی‌های حاصل از کشت خالص انجام شود.
• با توجه به نیازهای تغذیه‌ای متفاوت، ممکن است برخی از سویه‌ها مشاهده شوند که رشد ضعیفی دارند یا در این محیط رشد نمی‌کنند.
• ممکن است ارگانیسم‌های دیگری غیر از لاکتوباسیل‌ها در این محیط رشد کنند. ارگانیسم‌ها باید با آزمایش‌های بیوشیمیایی مناسب به عنوان لاکتوباسیل تایید شوند.

از صفحات زیر دیدن فرمایید:

دوره مهارت آموزی میکروبیولوژی

تست هیدرولیز لیپید

مراجع:

1. Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Scott’s diagnostic microbiology (Thirteenth edition.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
2. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/LactobacilliMRSBroth.html
3. labm.com/products/m-r-s-broth.asp
4. https://foodsafety.neogen.com/pdf/acumedia_pi/7406_pi.pdf
5. scharlabmagyarorszag.hu/katalogus/02-135_TDS_EN.pdf
6. https://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/Difco_BBL/288110.pdf

منبع

مترجم: بهار کنعانی