ابزار و وسایل آزمایشگاهی شامل، محلول ها کیت ها, ویکی ژن
اندو آگار (Endo Agar): ترکیب، اصول، روش آماده‌سازی و کاربرد
فهرست مطالب
نمایش
مقدمه‌ای بر اندو آگار (Endo Agar)
- اندو آگار توسط Endo جهت افتراق باکتری‌های گرم منفی بر اساس قابلیت تخمیر لاکتوز و در عین حال مهار رشد باکتری‌های گرم مثبت ساخته شد.
- این محیط رشد ارگانیسم‌ها را بدون استفاده از نمک‌های صفراوی (که به طور سنتی مورد استفاده قرار می‌گرفتند)، مهار می‌کند.
- اندو آگار باکتری‌های گرم مثبت در محیط خود را با افزودن سولفیت سدیم (Sodium sulfite) و فوشین بازی (basic fuchsin) مهار می‌کند.
- اندو آگار به دست آمده که با نام‌های فوشین سولفیت (Fuchsin Sulphite) و انفوزیون آگار (Infusion Agar) نیز شناخته می‌شود، برای جداسازی باسیل‌های تیفوئید (Typhoid) استفاده می‌شود.
- اصلاحات زیادی روی این محیط طی سال‌ها انجام شده است.
- اندو آگار یک محیط انتخابی است که برای تأیید تست احتمالی وجود اعضای گروه باکتری‌های کلیفرم (Coliform) از نمونه‌های بالینی و غیر بالینی توصیه می‌شود.
ترکیبات اندو آگار
| عناصر | گرم در لیتر |
| پپتون (Peptone) | 10 |
| لاکتوز (Lactose) | 10 |
| دی‌پتاسیم فسفات (Dipotassium phosphate) | 3.5 |
| سولفیت سدیم | 2.5 |
| فوشین بازی | 0.5 |
| آگار | 15 |
pH نهایی (در دمای 25 درجه سانتی‌گراد): 0.2 ± 7.5
اصول اندو آگار
- این محیط حاوی پپتون است که نیتروژن، کربن، ویتامین‌ها و مواد معدنی مورد نیاز برای رشد باکتری‌ها را فراهم می‌کند.
- سولفیت سدیم و فوشین بازی این محیط را با سرکوب ارگانیسم‌های گرم مثبت، انتخابی می‌کنند.
- کلنی‌های لاکتوز مثبت به دلیل واکنش آلدهید (Aldehyde) با سولفیت سدیم و فوشین بازی، رنگ قرمز ایجاد می‌کنند.
- زمانی که ارگانیسم با تخمیر لاکتوز، آلدئید تولید کند یک درخشش متالیک ایجاد می‌شود. باکتری‌های غیر تخمیرکننده لاکتوز، کلونی‌های شفاف و بی‌رنگ را تشکیل می‌دهند.
- بنابراین کلیفرم‌های تخمیرکننده لاکتوز، کلنی‌های صورتی تولید می‌کنند در حالی که غیر تخمیر‌کننده‌های لاکتوز، کلنی‌های بی‌رنگ را در محیط ایجاد می‌کنند.
- اشریشیا کلی (Escherichia coli) در این واکنش با متبلور شدن فوشین، درخشندگی متالیک مایل به سبز پایداری (درخشش فوشین) را در کلنی‌ها نشان می‌دهد.
- اگر رشد ارگانیسم بی‌رنگ، بژ یا غیر صورتی باشد، لاکتوز استفاده نمی‌شود و احتمالاً آن ارگانیسم یک غیرکلیفرم گرم منفی است.
- اگر کلنی رشد خوبی داشته باشد که صورتی/قرمز باشد، از لاکتوز استفاده می‌شود و احتمالاً باکتری یک کلیفرم گرم منفی است.
- اگر کلنی رشد خوبی به رنگ صورتی/قرمز با درخشش متالیک روشن داشته باشد، لاکتوز به میزان زیادی مورد استفاده قرار می‌گیرد و باکتری احتمالاً یک کلیفرم گرم منفی است.
- اگر ارگانیسم رشد ضعیفی داشته باشد یا رشد نداشته باشد، احتمالاً یک ارگانیسم گرم مثبت است.
آماده‌سازی و روش استفاده از اندو آگار
- 5 گرم از اندو آگار را در 1000 میلی‌لیتر آب مقطر بریزید.
- آن را حرارت داده تا به جوش آید و محیط کاملا حل شود.
- محیط را در اتوکلاو با فشار 15 پوند (121 درجه سانتی‌گراد) به مدت 15 دقیقه استریل کنید.
- محیط را قبل از ریختن در پلیت‌های پتری استریل خوب مخلوط کنید.
نکته: اگر محیط کشت جامد شده تا حدودی قرمز است، برای از بین بردن رنگ، چند قطره (حداکثر 1 میلی لیتر در هر لیتر) از محلول 10 درصد سولفیت سدیم که تازه تهیه شده است، اضافه کرده و بجوشانید.
- نمونه را در اسرع وقت پس از دریافت در آزمایشگاه به صورت رگه‌ای کشت کنید.
- کشت رگه‌ای در پلیت عمدتاً برای جداسازی کشت‌های خالص از نمونه‌های حاوی فلورا (flora) استفاده می‌شود.
- از طرف دیگر، اگر محیط مستقیماً با یک سواب کشت می‌شود، سواب را روی یک ناحیه کوچک در لبه سطح بغلتانید. سپس از این ناحیه تلقیح شده، محیط را رگه بزنید.
- یک محیط غیرانتخابی مانند کلمبیا آگار (Columbia Agar) با 5 درصد خون گوسفند نیز باید تلقیح شود تا نشانه‌ای از وجود ارگانیسم‌های دیگر در نمونه پیدا شود.
- پلیت‌ها را به مدت 18 تا 24 ساعت در دمای 2±35 درجه سانتی‌گراد، در شرایط محافظت شده از نور، انکوبه کنید.
تفسیر نتیجه در اندو آگار
| ارگانیسم | رشد |
| کلبسیلا آئروژنز (Klebsiella aerogenes) | رشد بسیار زیاد، کلنی‌های صورتی رنگ |
| انتروکوکوس فکالیس (Enterococcus faecalis) | رشد ضعیف؛ کلونی‌های کوچک صورتی
|
| اشریشیا کلی | رشد بسیار زیاد، کلنی‌های صورتی تا سرخ رنگ با یک درخشش متالیک |
| کلبسیلا پنومونی (Klebsiella pneumonia) | رشد بسیار زیاد، کلونی‌های موکوئید صورتی |
| پروتئوس ولگاریس (Proteus vulgaris) | رشد بسیار زیاد، کلونی‌های بی رنگ تا صورتی کم‌رنگ |
| سودوموناس آئروژینوزا (Pseudomonas aeruginosa) | رشد بسیار خوب، کلونی‌های بی رنگ و نامنظم |
| سالمونلا تیفی (Salmonella Typhi) | رشد بسیار زیاد، کلونی‌های بی رنگ تا صورتی کم‌رنگ |
| انتروباکتر کلوآکا (Enterobacter cloacae) | رشد خوب؛ کلنی‌های صورتی |
| سالمونلا تیفی موریوم (Salmonella Typhimurium) | رشد بسیار زیاد، کلنی‌های بی‌رنگ |
| سالمونلا انتریتیدیس (Salmonella Enteritidis) | رشد بسیار زیاد، کلنی‌های بی‌رنگ |
| شیگلا فلکسنر (Shigella flexneri) | رشد بسیار زیاد، کلنی‌های بی‌رنگ |
| انتروباکتر آئروژنز (Enterobacter aerogenes) | رشد خوب تا عالی. کلنی‌های سبز رنگ با یک درخشش متالیک |
موارد استفاده از اندو آگار
- این محیط در حال حاضر برای افتراق ارگانیسم‌های روده‌ای تخمیرکننده لاکتوز و غیر تخمیرکننده لاکتوز، به‌ویژه جهت تأیید تست احتمالی وجود کلیفرم‌ها استفاده می‌شود.
- اندو آگار به عنوان یک محیط کشت مهم، توسط انجمن داروسازان آمریکایی (APHA) در بررسی میکروبیولوژیکی آب و فاضلاب، محصولات لبنی و غذاها توصیه می‌شود.
- اندو آگار برای تأیید تشخیص و شمارش باکتری‌های کلیفرم در تست احتمالی آب آشامیدنی استفاده می‌شود.
- همچنین برای تشخیص و جداسازی کلیفرم‌ها و کلیفرم‌های مدفوعی از شیر، محصولات لبنی و غذا استفاده می‌شود.
- آندو آگار برای شمارش کلیفرم‌ها در آب با روش فیلتراسیون غشایی (Membrane filtration) در محیط آزمایشگاهی، استفاده می‌شود.
محدودیت‌های اندو آگار
- علاوه بر باکتری‌های انتروباکتریاسه (Enterobacteriaceae)، سایر باکتری‌های گرم منفی و مخمرها نیز ممکن است در این محیط رشد کنند.
- از قرار گرفتن محیط در معرض نور اجتناب کنید، زیرا ممکن است منجر به فتواکسیداسیون (Photooxidation) و کاهش راندمان محیط شود.
- از گرم شدن بیش از حد محیط باید اجتناب شود، زیرا ممکن است راندمان محیط را از کاهش دهد.
- برای تایید نتیجه تست باید آزمایشات بیوشیمیایی بیشتری انجام شود.
- اگر تلقیح بیش از حد سنگین باشد، درخشندگی کلنی ممکن است از بین برود.
- گاهی اوقات ارگانیسم‌های غیرکلیفرم ممکن است کلنی‌های براق معمولی تولید کنند. ارگانیسم‌های کلیفرم نیز ممکن است گاهی اوقات کلنی‌های غیر معمول از جمله کلنی‌های قرمز تیره یا هسته‌دار غیر براق تولید کنند.
جهت خرید و یا استعلام قیمت با ما تماس بگیرید یا در واتسپ پیام بزارید
همچنین بخوانید:
- آگار CLED: ترکیب، اصول، روش تهیه، نتایج و کاربرد
- مانیتول سالت آگار (آگار MSA)
- سابورو دکستروز آگار (SDA): ترکیب، اساس، کاربرد، تهیه و مورفولوژی کلنی
- آگار SCA (نشاسته کازئین آگار): ترکیب، کاربردها، آماده سازی و تفسیر
- آگار ستریماید (Cetrimide Agar): ترکیب، اساس، کاربردها، آماده سازی و مورفولوژی کلنی
مترجم: صادق حسینی‌کیا
هزینه و‌ناریخ شروع دوره سیتوژنتیک و کاریوتایپ به چه صورت هستش؟
سلام، جهت اطلاعات بیشتر به صفحه کارآموزی سیتوژنتیک مراجعه کنید
دوره پایتون چند جلسه است؟
با سلام،
جهت اطلاعات بیشتر به صفحه کارآموزی پایتون مراجعه کنید