انتخاب سیستم آنزیمی یا رنگ فلورسنت مناسب

 

در ایمونوهیستوشیمی مانند دیگر تکنیک های ایمونواسی سه بخش مهم وجود دارد :آنتی بادی ها، سیستم های تولید سیگنال برای ردیابی و فاز جامد که واکنش ها در بستر آن انجام می شود.

آنتی بادی ها مهم ترین جز از سیستم ایمونوهیستوشیمی هستند و به همین دلیل انتخاب آنتی بادی مناسب بسیار حائز اهمیت است. بهتر است که منبع آنتی بادی مورد استفاده یعنی حیوانی که از آن آنتی بادی گرفته شده است با منبع بافتی که روی آن کا ر می شود متفاوت باشد. در این روش با استفاده از آنتی بادی که به طور اختصاصی به آنتی ژن متصل می شود می توان وجود یا عدم وجود آنتی ژنی خاص در بافت را بررسی کرد. این اتصال می تواند مستقیم ( یک مرحله ای)  یاغیر مستقیم (دو مرحله ای) باشد.

در روش مستقیم، آنتی بادی اختصاصی آنتی ژن بافت به آنزیم متصل است آنزیم ها در مجاورت با سوبسترا تولید رنگ میکنند که در زیر میکروسکوپ نوری قابل مشاهده است. گاهی به جای آنزیم از رنگ فلورسنت استفاده می کنند که در این صورت ارزیابی نتایج با میکروسکوپ فلورسنت صورت می گیرد.

در روش غیر مستقیم آنتی بادی اختصاصی آنتی ژن به بافت متصل شده و بعد از آن آنتی بادی ثانویه را اضافه می کنیم که به آنتی بادی اولیه می چسبد  و از طرف دیگر هم به آنزیم کونژوگه است. این کار باعث تقویت رنگ تولید شده توسط سوبسترا می شود. زیرا به یک آنتی بادی اولیه بیش از یک آنتی بادی ثانویه می تواند اتصال پیدا کند.

آنتی بادی ثانویه  بخش FC آنتی بادی اولیه را شناسایی می کند. مثلا اگر منبع تهیه آنتی بادی اولیه  موش باشد آنتی بادی ثانویه باید ضد آنتی بادی های موشی باشد (Anti Mouse IgG Antibody).

افزودن آنتی بادی ها باید سوبسترای مناسب برای آنزیمی که به آنتی بادی متصل است را اضافه کنیم. مثلا برای آنزیم HRP سوبسترای مورد استفاده معمولا دی آمینوبنزیدین (DAB) است.

در انتها برای اینکه محدوده بافت و سلول ها مشخص باشد متناسب با رنگی که توسط سوبسترا تولید شده است از یک رنگ زمینه استفاده میکنیم مثلا DAB تولید رنگ قهوه ای میکند و رنگ آمیزی زمینه باید شباهتی با آن نداشته باشد. رنگی مثل هماتوکسیلین که آبی است برای این کار مناسب است مانند شکل زیر که لکه های قهوه ای در اثر اتصال آنتی بادی به آنتی ژن و در نتیجه تولید رنگ توسط سوبسترا است و رنگ آبی هماتوکسیلین به عنوان رنگ زمینه برای تشخیص محدوده بافت استفاده شده است.

در مورد رنگ های فلورسنت هم باید توجه داشت که رنگ زمینه سلول ها با رنگ متصل به آنتی بادی تداخل نداشته باشد. رنگ DAPI و PI به عنوان رنگ کننده های هسته سلول از متداول ترین رنگ های زمینه هستند.

از این مطلب چقدر راضی بودید؟

روی ستاره کلیک کنید تا نظرتون ثبت بشه

4.5 / 5. تعداد رای دهندگان: 2

تا حالا امتیازی برای این مطلب ثبت نشده؛ با ثبت نظرتون مارو خوشحال می‌کنید

1 دیدگاه برای “انتخاب سیستم آنزیمی یا رنگ فلورسنت مناسب

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *