بافر SDS-PAGE 10x

بافر SDS-PAGE 10x

SDS-PAGE یک روش الکتروفورز است که اجازه می دهد پروتئین ها بر اساس جرم تفکیک شوند. ژل SDS-PAGE که به آن ماتریس نیز گفته می شود، یک ژل ناپیوسته مبتنی بر پلی آکریل آمید است. در ساخت این ژل، علاوه بر آکریل آمید، از SDS (سدیم دودسیل سولفات) نیز استفاده می شود. حدود 1.4 گرم SDS به یک گرم پروتئین متصل می شود، به عبارتی دیگر، یک مولکول SDS، دو اسید آمینه را در بر می گیرد. SDS به عنوان یک سورفاکتانت عمل می کند. این ماده، بار ذاتی پروتئین ها را پوشانده و نسبت های بار به جرم بسیار مشابهی را در آن ها ایجاد می کند. بار ذاتی پروتئین ها در مقایسه با باری که توسط SDS داده شده است ناچیز است و بارهای مثبت نیز در محدوده pH پایه ژل جدا کننده کاهش می یابد. نهایتا با استفاده از یک میدان الکتریکی ثابت، پروتئین ها به سمت آند مهاجرت می کنند و هر کدام از آن ها، با توجه به جرمی که دارند، سرعتشان متفاوت است. این روش ساده، امکان تفکیک دقیق پروتئین ها بر اساس جرم را فراهم می کند.

نحوه تهیه بافر اجرا در SDS-PAGE (10x)

تریس، گلیسین و SDS، در ساخت این بافر استفاده می شود و معمولا تریس pH معادل 8.3 کاربرد بیشتری دارد. این بافر دارای pKa 8.1 است که باعث می شود یک بافر عالی در محدودهpH 7 الی 9 باشد. محدوده pH 7 الی 9 سبب شده تا گزینه مناسبی برای اکثر سیستم های بیولوژیکی باشد. SDS موجود در بافر سبب شده تا خطی بودن پروتئین ها حفظ شود. گلایسین نیز یک اسید آمینه است که بار آن نقشی اساسی را در ژل فشرده کننده ایفا می کند. کمی بیشتر در این باره

مواد و مقدار مورد نیاز برای تهیه 1 لیتر بافر اجرا SDS-PAGE (10x)

مواد مورد نیاز	مقدار مورد نیاز	غلظت
Tris base (mw: 121.14 g/mol)	30.3 g	0.2501 M
Glycine (mw: 75.07 g/mol)	144.4 g	1.924 M
SDS (mw: 288.38 g/mol)	10 g	0.0347 M