ابزار و وسایل آزمایشگاهی شامل، محلول ها کیت ها, دستگاه ها
لام هموسیتومتر چیست؟ کاربردها و روش کار
هدف استفاده از هموسیتومتر
لام هموسیتومتر یا (haemocytometer یا محفظه شمارش) یک اسلاید نمونه است که برای تعیین غلظت سلول ها در یک نمونه مایع استفاده می‌شود. این وسیله اغلب برای تعیین غلظت سلول‌های خونی (که از این رو به آن “همو-” می‌گویند) و همچنین برای تعیین غلظت سلول‌های اسپرم در یک نمونه استفاده می‌شود.
پوشش شیشه‌ای که روی نمونه قرار می‌گیرد، به راحتی روی مایع شناور نمی‌ماند، بلکه در ارتفاع مشخصی (معمولاً 0.1 میلی متر) در جای خود نگه داشته می‌شود. علاوه بر این، خطوط شطرنجی در شیشه هموسیتومتر حک می‌شود. این خطوط شطرنجی که مربع‌هایی با اندازه‌های مختلف در کنار هم قرار می‌دهند، امکان شمارش آسان سلول‌ها را فراهم می‌کند. به این ترتیب می‌توان تعداد سلول‌ها را در یک حجم مشخص تعیین کرد.
آماده‌سازی نمونه:
مایع حاوی سلول‌ها باید قبل از اعمال آن روی هموسیتومتر به طور مناسب آماده شود.
میکس اولیه: مایع میکس اولیه باید یک سوسپانسیون همگن باشد.
همچنین شمارش سلول‌هایی که به صورت توده بهم می‌چسبند و به طور یکنواختی پخش نمی‌شوند، دشوار است.
غلظت مناسب: غلظت سلول‌ها نباید خیلی زیاد یا خیلی کم باشد. اگر غلظت خیلی زیاد باشد، سلول‌ها روی هم قرار گرفته و شمارش آنها دشوار است. غلظت کم تنها چند سلول در هر مربع منجر به خطای آماری بالاتری می‌شود و سپس منجر به شمارش مربع‌های بیشتری می‌شود که زمان بیشتری می‌برد.
سوسپانسیون‌هایی که غلظت خیلی بالایی دارند باید با نسبت 1:10 ، 1:100 و 1:1000 رقیق شوند. رقیق سازی نسبت 1:10 را می‌توان با برداشتن یک قسمت از نمونه و مخلوط کردن آن با نه قسمت آب (یا نمک با غلظت صحیح برای جلوگیری از ترکیدن سلول‌ها) ایجاد کرد. رقیق سازی باید پس از محاسبه غلظت نهایی در نظر گرفته شود.
شمارش سلول‌ها
- شمارش سلول‌هایی که روی یک خط قرار دارند: سلول‌هایی که روی یکی از خطوط شطرنجی قرار دارند نیاز به توجه ویژه دارند. سلول‌هایی که روی خطوط بالا و سمت راست مربع قرار می‌گیرند نباید شمرده شوند و سلول‌های سمت چپ و پایین باید شمرده شوند.
- تعداد مربع‌هایی که باید شمرده شوند: هر چه غلظت کمتر باشد، مربع‌های بیشتری باید شمارش شود و در غیر این صورت خطاهای آماری اتفاق می‌افتد. چند مربع باید شمرده شود؟ برای یافتن این موضوع می‌توان غلظت سلول در هر میلی لیتر را بر اساس اعداد به دست آمده از دو مربع مختلف محاسبه کرد. اگر نتیجه نهایی بسیار متفاوت باشد، این می‌تواند نشانه‌ای از خطای نمونه برداری باشد.
محاسبه تراکم سلولی
در اینجا لازم است مقداری محاسبات ساده ریاضی انجام دهیم. اعداد موارد زیر مورد نیاز است:
- تعداد سلول‌های شمارش شده در یک مربع
- مساحت مربع، ارتفاع نمون
- عامل رقیق ساز
هدف این است که تعداد سلول‌ها را در 1 میلی لیتر محلول اصلی پیدا کنیم.
- مرحله اول – میانگین‌گیری: اگر کسی همه سلول‌ها را در یک مربع بزرگ (یک میلی‌متر × یک میلی‌متر) شمارش نکرد، لازم است قبل از ادامه، ابتدا میانگین نتایج را محاسبه کرد. برای هدف این مثال، در اینجا از تعداد سلول‌های متوسط 123.456 سلول استفاده شده است.
- مرحله دوم – محاسبه حجم: تعیین حجم نشان داده شده توسط مربع ضروری است. عرض و ارتفاع مربع (0.25 میلی‌متر×0.25 میلی‌متر) باید در ارتفاع نمونه ضرب شود (اغلب روی هموسیتومتر چاپ می‌شود، در این مثال 0.1 میلی‌متر است): v = 0.25mm x 0.25mm x 0.1mm = 0.00625mm³ = 0.00625ul (که ul میکرولیتر است)
- مرحله سوم – محاسبه تعداد سلول‌ها در 1 میلی لیتر: اگر 123.456 سلول در 0.00625 ul وجود دارد، پس چند سلول در 1 میلی لیتر (=1000 ul) وجود دارد؟ نسبت مستقیم ساده را انجام می‌دهیم:
123.456cells/0.00625ul = X/1000ul
(123.456cells*1000ul)/0.00625ul = X (ul بی اثر می‌شود )
X = 19 752 960 cells
- مرحله چهارم – اصلاح میزان رقیق سازی: اگر نمونه قبل از شمارش رقیق شده باشد، این امر نیز باید در نظر گرفته شود. ما فرض می‌کنیم که نمونه 1:10 رقیق شده است. بنابراین نتیجه نهایی 19 752 960 سلول x 10 = 197 529 600 سلول در 1 میلی‌لیتر است که شامل تعداد زیادی سلول می‌باشد.
مواردی که با دقت باید بررسی شوند
- نوع حفره‌های شمارش: انواع مختلفی از حفره‌های شمارش با اندازه‌های خطوط شطرنجی متفاوت وجود دارد. یک محفظه شمارش نیز دارای خطوط شطرنجی با اندازه‌های مختلف است. مراقب باشید که اندازه و ارتفاع خطوط شطرنجی را بدانید (دفترچه راهنمای دستورالعمل را بخوانید) در غیر این صورت در محاسبه اشتباه خواهید کرد.
- از شیشه‌های محافظ ارائه شده استفاده کنید: ضخیم تر از شیشه‌های روکش استاندارد 0.15 میلی متری هستند. بنابراین انعطاف پذیری کمتری دارند و کشش سطحی سیال، باعث تغییر شکل آنها نمی‌شود. به این ترتیب، ارتفاع سیال استاندارد می‌شود.
- سلول‌های متحرک: شمارش سلول‌های متحرک (مانند سلول‌های اسپرم) دشوار است. این سلول‌ها ابتدا باید بی‌حرکت شوند.
- هموسیتومتر بسیار ضخیم تر از یک اسلاید معمولی است. مراقب باشید که هنگام تنظیم وضوح، هموسیتومتر به نمونه آسیب وارد نکند.
کاربرد های لام هموسیتومتر
- شمارش سلول های خونی: برای بیمارانی با سلول های غیر طبیعی خون ، در مورد این سلول ها، شمارنده های خودکار نمی توانند به خوبی عمل کنند.
- شمارش تعداد اسپرم ها
- در کشت سلولی: شمارش سلول ها در کشت یا ثبت میزان رشد سلول ها در طول زمان
- شمارش سلول های فیتوپلانکتون
- در بسیاری از آزمایشات (PCR، فلوسیتومتری) به تعداد دقیق سلول نیاز است.
- اندازه گیری اندازه سلول: در یک میکروگراف، اندازه سلول واقعی را می توان با مقیاس گذاری آن به عرض یک مربع هموسیتومتر ، که شناخته شده است، تعیین کرد.
جهت خرید و یا استعلام قیمت با ما تماس بگیرید یا در واتسپ پیام بزارید
همچنین بخوانید:
مترجم: دیبا ضابطی
کاربرد این لام
سلام همان طور که در متن ذکر شده
کاربرد های لام هموسیتومتر:
شمارش سلول های خونی
شمارش تعداد اسپرم ها
در کشت سلولی
شمارش سلول های فیتوپلانکتون
اندازه گیری اندازه سلول