فهرست مطالب
نمایش
مقدمه‌ای بر تهیه محلول استوک بردفورد
- این محلول به طور عمده برای تعیین غلظت پروتئین در محلول استفاده می شود.
- اصول تشخیص براساس تشکیل کمپلکسی بین رنگ، آبی براق G، و پروتئین های موجود در محلول است.
- کمپلکس رنگ پروتئین باعث تغییر در حداکثر جذب رنگ از 465 نانومتر به 595 نانومتر می شود. مقدار جذب با مقدار پروتئین موجود متناسب است.
- رنگ بردفورد نیازی به رقیق سازی ندارد و برای آزمایش های میکرو، پلیت چاهک دار و استاندارد مناسب است.
- این محلول همچنین با عوامل کاهنده ای که اغلب برای تثبیت پروتئین ها در محلول استفاده می شود سازگار است.
- این محلول حاوی آبی براق G در اسید فسفریک و متانول است.
- محلول استوک بردفورد در صورت باز نشدن درب ظرف حداقل به مدت 1 سال در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد پایدار است.
تهیه محلول استوک بردفورد
برای تهیه 1 لیتر محلول استوک بردفورد، به مواد زیر نیاز دارید:
|
ترکیب |
مقدار |
غلظت |
| اتانول (95%) (وزن مولکولی: 46.07 گرم بر مول) | 333 میلی لیتر | 31.67٪ |
| اسید فسفریک (88%) (وزن مولکولی: 58.4 گرم بر مول) | 667 میلی لیتر | 58.67٪ |
| Coomassie Brilliant Blue (وزن مولکولی: 825.97 گرم بر مول) | 1.16 گرم | 1.41 مولار |
دستورالعمل تهیه محلول استوک بردفورد برای یک لیتر
- 0 میلی لیتر آب مقطر را در ظرف مناسبی آماده کنید
- 333 میلی لیتر اتانول (95%) را به محلول اضافه کنید.
- 667 میلی لیتر اسید فسفریک (88%) را به محلول اضافه کنید.
- 1.16 گرم Coomassie Brilliant Blue را به محلول اضافه کنید.
- آب مقطر اضافه کنید تا حجم کل محلول به 1 لیتر برسد. (برای یک لیتر نیازی نیست)
مقدار صفر برای آب مقطر درست نوشته شده است. در صورتی که مقادیر دیگری میخواهید درست کنید به سایت زیر مراجعه کنید و مقدار مورد نیاز را در قسمت بالای صفحه ذکر کنید تا دستور العمل برای شما محاسبه شود:
https://www.aatbio.com/resources/buffer-preparations-and-recipes/bradford-stock-solution
همچنین بخوانید:
مترجم: محمد صادق محمودی لرد
