راهنمای خرید رده سلولی RAW 264.7
RAW 264.7 یک رده سلولی ماکروفاژ است که از یک تومور در موش نر ناشی از ویروس لوسمی موشی آبلسون ایجاد شد.
سطح ایمنی زیستی: BSL2 (بیشتر بدانید)
| رده محصولات | سلول های حیوانی |
| ارگانیسم | موش صحرایی |
| نوع سلول | ماکروفاژ |
| مورفولوژی | منوسیت/ ماکروفاژ |
| بافت | آسیت |
| بیماری | تومور ناشی از ویروس لوسمی موشی آبلسون |
| کاربردها | کشت سلولی سه بعدی
تحقیق در مورد اختلالات سیستم ایمنی ایمونولوژی |
| شرایط نگهداری | فاز بخار نیتروژن مایع |
| استفاده در نظر گرفته شده | این رده سلولی میزبان ترانسفکشن مناسبی است.
سلول ها قرمز خنثی را پینوسیتوز می کنند و دانه های لاتکس و زیموسان را فاگوسیتوز می کنند. آنها قادر به لیز وابسته به آنتی بادی گلبول های قرمز گوسفند و اهداف سلول های تومور هستند. درمان LPS یا PPD به مدت 2 روز لیز گلبول های قرمز را تحریک می کند اما اهداف سلول های تومور را تحریک نمی کند. |
| حجم فلاسک | T25, T75 |
|---|
خصوصیات
| خصوصیات رشد | چسبنده |
| استخراج | این خط از تومور ناشی از ویروس لوسمی موشی آبلسون ایجاد شد. |
| سن | بالغ |
| نژاد | BALB/c |
| جنسیت | مرد |
| روش نامیرا کردن | ویروس لوسمی موشی آبلسون تبدیل شد |
| آنتی ژن بیانی | H-2d |
| ژنهای بیانی | لیزوزیم؛ H-2d; ویروس اکتروملیا (پوکس موش) منفی است. |
| مارکرهای بیانی | Complement (C3) |
| نظرات | تکثیر این رده سلولی آسان است، کارایی بالایی برای ترانسفکشن DNA دارد، حساسیت به تداخل RNA دارد و از تکثیر نورویروس های موش پشتیبانی می کند. این رده سلولی برای ایمونوگلوبولین سطحی (sIg-)، Ia (Ia-) و Thy-1.2 (Thy-1.2) منفی است. هنگامی که این خط ایجاد شد، به عنوان عدم ترشح ذرات ویروسی قابل تشخیص و منفی با استفاده از روش تشکیل پلاک XC توصیف شد. بر اساس مطالعه منتشر شده توسط دکتر Janet W. Hartley در سال 2008، این خط نشان داده شد که MuLV اکوتروپیک و پلی تروپیک را بیان می کند و با استفاده از سنجش پلاک XC برای تکثیر ویروس مثبت است. |
اطلاعات نگهداری
| دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی
|
1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.
2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.
|
| محیط کامل
|
محیط پایه برای این رده سلولی RPMI 1640
برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10% را به محیط پایه اضافه کنید.
|
| درجه حرارت | 37 درجه |
| شرایط نگهداری
|
برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای -70 درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.
1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگه دارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه). 2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود. 3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7.0 تا 7.6) برسد. 4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، CO2 5٪ در جو هوا توصیه می شود. اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود x g 125به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.
|
| روش پاساژ دادن
|
حجم ها برای یک فلاسک 75 سانتی متر مربع داده شده است. مقدار محیط تفکیک مورد نیاز را متناسب با ظروف کشت با اندازه های دیگر افزایش یا کاهش دهید.
1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید. 2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول تریپسین 0.25% (w/v) – 0.53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود. 3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه). توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود. 4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید. 5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به فلاسک های کشت جدید اضافه کنید. 6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید. روش پاساژ: نسبت 1:3 و 1:6 توصیه می شود. تعویض محیط: 2 تا 3 بار در هفته |
| معرف برای انجماد
|
50% culture medium + 40% FBS + 10% DMSO |
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.