راهنمای خرید رده سلولی MRC-5

MRC-5 یک رده سلولی دیپلوئیدی d در تولید واکسن‌هایی از جمله هپاتیت A، فلج اطفال و MCR-5 است و از فیبروبلاست‌های جدا شده از بافت ریه که از یک جنین نر 14 هفته‌ای سفید رنگ گرفته شده است، تشکیل شده است. توسط J.P. Jacobs در سال 1966. سلول ها قادر به 42 تا 46 دو برابر شدن جمعیت هستند.

سطح ایمنی زیستی: BSL1 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی ATCC رده سلولی MRC-5

جهت مشاوره با ما تماس بگیرید

رویه تکمیل سفارشات

دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های انسانی
ارگانیسم	انسان خردمند
نوع سلول	فیبروبلاست
مورفولوژی	فیبروبلاست
بافت	ریه
بیماری	نرمال
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی تولیدات زیستی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

استفاده در نظر گرفته شده

تست اثربخشی

میزبان ترانسفکشن

حجم فلاسک	T25, T75

خصوصیات

خصوصیات رشد	چسبنده
استخراج	رده سلولی MRC-5 از بافت طبیعی ریه یک جنین نر 14 هفته ای توسط J.P. Jacobs در سپتامبر 1966 مشتق شد.
سن	هفته 14 بارداری
نژاد	سفید
جنسیت	مرد
کاریوتایپ	توزیع فرکانس کروموزوم 50 سلول: 2n = 46. این یک رده سلولی طبیعی دیپلوئید انسانی با کاریوتیپ 46، XY است. تعداد کروموزوم مدال 46 بود که در 70 درصد سلول ها وجود داشت. میزان پلی پلوئیدی 3.6 درصد بود. هر دو کروموزوم X و Y نرمال بودند. توجه: اطلاعات سیتوژنتیک بر اساس ذخیره اولیه بذر در ATCC است. بی ثباتی سیتوژنتیک در مقالات برای برخی از رده های سلولی گزارش شده است.
حساسیت ویروسی	Human poliovirus 1 Herpes simplex virus Vesicular stomatitis, Glasgow (Indiana) Vesicular stomatitis, Orsay (Indiana)
ایزوآنزیم ها	G6PD, B
نظرات	سلول ها قادرند 42 تا 46 جمعیت را قبل از شروع پیری دو برابر کنند.

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی DMEM High glucose

برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10% را به محیط پایه اضافه کنید.

درجه حرارت

37 درجه

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای -70 درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگه دارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7.0 تا 7.6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، CO2 5٪ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود g 125به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

حجم ها برای یک فلاسک 75 سانتی متر مربع داده شده است. مقدار محیط تفکیک مورد نیاز را متناسب با ظروف کشت با اندازه های دیگر افزایش یا کاهش دهید.

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول تریپسین 0.25% (w/v) – 0.53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه).

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به فلاسک های کشت جدید اضافه کنید.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

مراحل پاساژ: نسبت 1:2 و 1:5 توصیه می شود

تعویض محیط: 1 تا 2 بار در هفته

معرف برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO