تعریف تست سالیوان و مککارتی
تست سالیوان و مککارتی یک آزمایش بیوشیمیایی برای شناسایی اسید آمینه متیونین (Methionine) یا پروتئینهای حاوی متیونین است. این تست یک آزمایش با درجه بالایی از اختصاصی بودن برای متیونین است، زیرا سایر اسیدهای آمینه در این تست نتایج منفی میدهند. با این حال تست گلیسیلمتیونین (Glycylmethionine) نتیجه مثبتی ارائه میدهد.
این تست به دلیل سریع و ساده بودن حتی در صورت تخمیر عصاره، یک روش مطلوب برای شناسایی متیونین است. تست سالیوان و مککارتی یک واکنش رنگی پروتئین است که حضور یک مولکول خاص را به وسیله ایجاد یک رنگ به خصوص با یک شناساگر ویژه نشان میدهد.
اهداف تست سالیوان و مککارتی
- برای تشخیص وجود اسید آمینه متیونین یا پروتئینهای حاوی متیونین.
- برای افتراق متیونین از سایر اسیدهای آمینه حاوی گوگرد مانند سیستئین (Cystein) و سیستین (Cystine).
اصول تست سالیوان و مککارتی
تست سالیوان و مککارتی بر اساس واکنش بین نیتروپروساید (Nitroprusside) و محلول قلیایی متیونین تحت فرایند اسیدی شدن میباشد. این تست زمانی ابداع شد که مشخص شد تریپتوفان (Tryptophan) و هیستیدین (Histidine) هر دو در شرایط مشابه با نیتروپروساید رنگ قرمز تولید میکنند. بنابراین اسید به محلول نمونه اضافه میشود تا تریپتوفان موجود توسط فرآیند هیدرولیز اسید از بین برود.
به طور مشابه بیان شده است که افزودن گلیسین (Glycine) مانع شناسایی هیستیدین میشود. رنگ قرمز پس از افزودن نیتروپروساید سدیم (Sodium nitroprusside) به محلول قلیایی متیونین و سپس اسیدی شدن واکنش به دست میآید.

نیازمندیها
شناساگر
- نیتروپروساید سدیم 10%
- هیدروکسید سدیم 5N (5N Sodium hydroxide)
- 6N HCl
- گلیسین 2%
- نمونه محلول
تجهیزات مورد نیاز
- بنماری (Water bath)
- حمام یخ (Ice bath)
- ورتکس (Vortex)
- لولههای آزمایش
- پایه لوله آزمایش
- پیپتها (Pipette)
روش تست سالیوان و مککارتی
- چند قطره هیدروکسید سدیم به 1 میلیلیتر محلول تستی در یک لوله آزمایش اضافه کنید.
- به آن چند قطره محلول گلیسین 2 درصد و نیتروپروساید سدیم 10 درصد اضافه کنید.
- سپس محلول را با قرار دادن آن در ورتکس به مدت 2 دقیقه با هم مخلوط کنید.
- حال لوله آزمایش را به مدت 15 دقیقه در بنماری با دمای 40 درجه سانتیگراد قرار دهید.
- اکنون لوله را به مدت 5 دقیقه در حمام یخ خنک کنید و سپس 0.5 میلیلیتر 6N HCl به آن اضافه نمایید.
- محتویات در یک ورتکس با هم مخلوط کرده، سپس لوله آزمایش را به مدت 15 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید. حال لوله را از نظر تغییر رنگ بررسی کنید.
نتیجه و تفسیر تست سالیوان و مککارتی
- نتیجه مثبت: نتیجه مثبت با ظهور رنگ قرمز نشان داده میشود. این امر نشان دهنده وجود متیونین است.
- نتیجه منفی: نتیجه منفی با عدم وجود رنگ قرمز نشان داده میشود. این امر نشان دهنده عدم وجود متیونین است.
موارد استفاده از تست سالیوان و مککارتی
- تست سالیوان و مککارتی برای شناسایی متیونین چه به صورت آزاد و چه موجود در پروتئین استفاده میشود.
- با بررسی میزان تطابق نمونه آزمایشی با محلول متیونین استاندارد، میتوان این تست را جهت کمیسازی خصوصیات متیونین اصلاح کرد.
محدودیتها
- تست ممکن است با لوسین (Leucine) که به صورت تجاری تهیه شده است، نتیجه مثبت بدهد، زیرا ممکن است حاوی مقداری متیونین باشد.
- محلولهای استاندارد متیونین در این تست ممکن است نتایج قابل تکرار ارائه نکنند.
همچنین بخوانید:
- تست سولفید سرب (Lead Sulfide Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
- تست هاپکینز کول (Hopkin’s Cole Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
- تست بارفود (Barfoed’s Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
- تست ONPG: اصول، روش، نتایج و موارد استفاده
مترجم: صادق حسینیکیا