تست بارفود (Barfoed’s Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده

تعریف تست بارفود

تست بارفود یک آزمایش شیمیایی است که برای تشخیص وجود مونوساکاریدها (Monosaccharide) استفاده می‌شود و مونوساکاریدهای کاهنده را در حضور دی‌ساکاریدها (Disaccharide) شناسایی می‌کند. این واکنش را می‌توان برای دی‌ساکاریدها استفاده کرد، اما واکنش بسیار کند خواهد بود.

اهداف تست بارفود

• برای شناسایی کربوهیدرات‌های کاهنده
• برای افتراق مونوساکاریدهای کاهنده از دی‌ساکاریدها

اصول تست بارفود

شناساگر Barfoed از استات مس (Copper acetate) در محلول رقیق اسید استیک ساخته شده است. از آن‌جایی که PH اسیدی برای کاهش نامطلوب است، مونوساکاریدها که عوامل کاهنده قوی هستند، در حدود 1 تا 2 دقیقه واکنش نشان می‌دهند.

با این حال دی‌ساکاریدهای کاهنده به زمان بیشتری (در حدود 7 تا 8 دقیقه) نیاز دارند، ابتدا باید در محلول اسیدی هیدرولیز شوند و سپس با شناساگر واکنش دهند. پس از انجام واکنش، رسوب نازک قرمز رنگی در انتهای جداره لوله آزمایش تشکیل می‌شود. بنابراین تفاوت در زمان ظهور رسوب به افتراق بین مونوساکاریدهای کاهنده از دی‌ساکاریدهای کاهنده کمک می‌کند.

واکنش

((CH₃COO)₂Cu  +   2H₂O         →         2CH₃COOH  + Cu(OH)₂

Cu(OH)₂       →         CuO +  H₂O

D-glucose + 2CuO        →        D-gluconic acid +   Cu₂O

نیازمندی‌ها

1. شناساگر

• شناساگر Barfoed: در این شناساگر محلول 0.33 مولار استات مس به اسید استیک 1% اضافه می‌شود. برای سنجش باید از شناساگر تازه تهیه شده استفاده شود.
• نمونه

2. وسایل مورد نیاز

• لوله‌های آزمایش
• پایه لوله آزمایش
• پیپت‌ها (Pipette)

3. تجهیزات

• بن‌ماری (Water bath)
• ورتکس (Vortex)

مراحل تست بارفود

• 1 میلی‌لیتر از یک نمونه داده شده را در یک لوله آزمایش تمیز و خشک بریزید. غلظت نمونه دی‌ساکاریدها (در صورت استفاده) نباید از 1% وزنی/ حجمی (w/v) تجاوز کند.
• 1 میلی‌لیتر آب مقطر را در لوله دیگری به عنوان لوله کنترل بریزید.
• حدود 2 تا 3 قطره از شناساگر Barfoed را به هر دو لوله اضافه کنید و آن‌ها را در یک ورتکس مخلوط کنید.
• لوله‌های آزمایش را به مدت 1 تا 2 دقیقه در بن‌ماری قرار دهید. عمل جوشاندن نباید بیش از 2 دقیقه طول بکشد زیرا ممکن است دی‌ساکاریدها به مونوساکارید هیدرولیز شده و نتیجه مثبتی ارائه دهد.
• ایجاد رنگ را در لوله‌های آزمایش بررسی کنید.
• زمان صرف شده برای ظهور رنگ در لوله‌ها را یادداشت کنید.

نتیجه و تفسیر تست بارفود

• وجود رسوب قرمز، وجود مونوساکاریدهای کاهنده را در نمونه مشخص می‌کند.
• اگر رنگ در چند دقیقه اول ظاهر شود، نمونه حاوی مونوساکاریدهای کاهنده است.
• با این حال اگر رنگ دیرتر از 3 دقیقه ظاهر شود، نمونه شامل دی‌ساکاریدهای کاهنده است.

موارد استفاده از تست بارفود

• از این تست جهت شناسایی مونوساکاریدهای کاهنده و افتراق دی‌ساکاریدهای کاهنده از مونوساکاریدهای کاهنده استفاده می‌شود.

محدودیت‌های تست بارفود

• از این تست نمی‌توان برای شناسایی قند در ادرار استفاده کرد زیرا ادرار حاوی یون‌های کلر است که ممکن است در واکنش تداخل ایجاد کند.
• اگر غلظت بالاتری از دی‌ساکاریدها در یک نمونه وجود داشته باشد، ممکن است نتیجه مثبت ارائه دهد.

همچنین بخوانید:

• تست ایزاتین (Isatin Test): تعریف، اهداف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
• تست هاپکینز کول (Hopkin’s Cole Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
• تست نین هیدرین (Ninhydrin Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده

منبع

مترجم: صادق حسینی‌کیا