تعریف تست ایزاتین
تست ایزاتین یک آزمایش بیوشیمیایی برای شناسایی اسیدهای آمینه مانند پرولین (Proline) و هیدروکسی‌پرولین (Hydroxyproline) است. این تست یک آزمایش مخصوص اسیدهای آمینه‌ای است که یک محصول افزایشی رنگی (که فزون‌ورده (Adduct) نیز نامیده می‌شود) با شناساگر ایزاتین، تولید می‌کنند.
روش‌های شناسایی پرولین ایمینو اسید برای مدت طولانی رضایت‌بخش نبود، زیرا این روش‌ها مانند تست نین‌هیدرین (Ninhydrin) تنها پس از جداسازی از سایر اسیدهای آمینه می‌توانستند پرولین را شناسایی کنند. بعداً در سال 1971، Fouad N. Boctor واکنشی بین پرولین و ایزاتین را کشف کرد که می‌توان از آن برای تعیین کمی و کیفی میزان پرولین استفاده کرد. افتراق بین پرولین و هیدروکسی‌پرولین را نمی‌توان با این تست انجام داد، زیرا ایزاتین با هر دو ترکیب واکنش داده و یک محصول رنگی تولید می‌کند.
اهداف تست ایزاتین
- برای تشخیص وجود پرولین و پروتئین‌های حاوی هیدروکسی‌پرولین در یک نمونه.
- برای تشخیص پرولین و هیدروکسی‌پرولین از سایر اسیدهای آمینه.
اصول تست ایزاتین
شناساگر ایزاتین مورد استفاده در تست به عنوان یک عامل آشکار ساز عمل کرده و رنگ‌های مختلف را با اسیدهای آمینه مختلف از طریق تکنیک کروماتوگرافی ارائه می‌دهد. واکنش ایزاتین با پرولین و هیدروکسی‌پرولین یک محصول آبی رنگ خاص تولید می‌کند. واکنش بین اسیدهای ایمینو مانند پرولین و هیدروکسی‌پرولین و ایزاتین (1H-indole-2,3-dione) یک ترکیب فزون‌ورده آبی رنگ ایجاد می‌کند. این واکنش یک واکنش افزایشی ساده بوده که در آن ترکیب ایزاتین و پرولین یک محصول رنگی تولید می‌کند که نشان دهنده وجود اسیدهای آمینه است.
نیازمندی‌ها
شناساگر
- شناساگر ایزاتین: محلول 0.02 درصد ایزاتین با حل کردن کریستال‌های ایزاتین در بافر 0.5 مولار سیترات سدیم در pH بین 3 تا 11 تهیه می‌شود.
- نمونه
- HCl غلیظ
لوازم مورد نیاز
- کاغذ صافی واتمن شماره 1
- اُوِن هوای گرم (Oven)
- پیپت‌ها
روش انجام تست ایزاتین
- یک قطره از محلول نمونه (ایمینو اسید) به کاغذ صافی واتمن شماره 1 اضافه کرده و با قرار دادن آن در اُوِن خشک کنید.
- اکنون یک قطره از شناساگر ایزاتین را به محل خشک شده اضافه کرده و فرآیند خشک کدن در اُوِن را تکرار کنید.
- سپس کاغذ را از نظر تشکیل یک لکه آبی رنگ بررسی کنید.
نتیجه و تفسیر تست ایزاتین
- نتیجه مثبت: تست مثبت ایزاتین با تشکیل لکه آبی رنگ روی کاغذ صافی نشان داده می‌شود. این امر نشان دهنده وجود اسیدهای آمینه است.
- نتیجه منفی: تست منفی ایزاتین با تشکیل لکه صورتی رنگ روی کاغذ صافی نشان داده می‌شود. این امر نشان دهنده عدم وجود اسیدهای آمینه است.
موارد استفاده از تست ایزاتین
- این تست برای شناسایی اسیدهای آمینه پرولین و هیدروکسی‌پرولین در یک محلول نمونه استفاده می‌شود.
- تست ایزاتین یکی از تست‌های استاندارد جهت شناسایی هیدروکربن‌ها و فنل‌های (Phenol) چند هسته‌ای در هوای آلوده است.
- این روش ساده، سریع و مناسب برای تخمین محتوای پرولین در نمونه‌های بزرگ‌تر است.
محدودیت‌ها
- رنگ مشاهده شده در تست باید با دقت بررسی شود و در صورت مشاهده رنگ‌های در هم، تست باید تکرار شود.
همچنین بخوانید:
- تست هاپکینز کول (Hopkin’s Cole Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
- تست نیتروپروساید (Nitroprusside Test): تعریف، اصول، روش، تفسیر نتایج و موارد استفاده
- تست نین هیدرین (Ninhydrin Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
- تست میلون (Millon’s Test): تعریف، اصول، روش، نتیجه و موارد استفاده
مترجم: صادق حسینی‌کیا
