2,090,000 تومان

راهنمای خرید رده سلولی KG-1

رده سلولی KG-1 از ماکروفاژهای جدا شده از آسپیراسیون مغز استخوان به دست آمده از یک مرد سفید پوست 59 ساله مبتلا به اریترولوکمی تشکیل شده است که به لوسمی میلوژن حاد تبدیل شده است. KG-1 در تحقیقات سرطان، ایمونولوژی و سم شناسی استفاده می شود.

سطح ایمنی زیستی: BSL1 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی ATCC رده سلولی KG-1

جهت خرید یا مشاوره با ما تماس بگیرید

دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های انسانی
ارگانیسم	انسان خردمند، انسان
مورفولوژی	ماکروفاژ
بافت	مغز استخوان
بیماری	لوسمی میلوئیدی حاد
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی تحقیق در مورد اختلالات سیستم ایمنی ایمونولوژی سم شناسی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

استفاده در نظر گرفته شده

این محصول فقط برای استفاده تحقیقات آزمایشگاهی در نظر گرفته شده است و برای هیچ گونه استفاده درمانی حیوانی یا انسانی، مصرف انسانی یا حیوانی، یا هر گونه استفاده تشخیصی در نظر گرفته نشده است.

خصوصیات

خصوصیات رشد	معلق
استخراج	رده سلولی KG-1 توسط H.P. کوفلر و دی. گلد. یک آسپیرات مغز استخوان از یک مرد 59 ساله قفقازی مبتلا به اریترولوکمی به دست آمد که به لوسمی میلوژن حاد تبدیل شد.
سن	59 ساله
نژاد	سفید
جنسیت	مرد
کاریوتایپ	تعداد کروموزوم خط بنیادی تقریباً دیپلوئید است و جزء 2S در 8/1% رخ می دهد. پنج نشانگر (نشانگرهای سازنده) در اکثر متافازهای مورد تجزیه و تحلیل، اگر نه همه، مشترک بودند. عدد کروموزوم مدال 47 است (یا 46 به اضافه یک کروموزوم متاسانتریک کوچک که از کروموزوم گروه G1 کوچکتر است). کروموزوم‌های نرمال 5، 7، 8، 12 و 17 تک‌زومی و بقیه دیزومی بودند. کروموزوم Y در آماده سازی باند Q قابل شناسایی است.
بیان آنتی ژنی	HLA A30, A31, B35, Cw4
ژنهای بیان شده	HLA-DR
ایزوآنزیم ها	AK-1, 0 ES-D, 1 G6PD, B GLO-I, 2 Me-2, 1 PGM1, 1-2 PGM3, 0
نظرات	میلوبلاست های KG-1 می توانند در حضور استرهای فوربول به ماکروفاژها متمایز شوند. آنها پاسخ خوبی به فاکتور تحریک کننده کلنی (CSF) نشان می دهند. رده EBNA منفی (EBNA-) است.

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی RPMI 1640

برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 20% را به محیط پایه اضافه کنید.

درجه حرارت

37 درجه

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای 70- درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگهدارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7/0 تا 7/6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، %5 CO₂ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود g125 به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

حجم ها برای یک فلاسک 75 سانتی متر مربع داده شده است. مقدار محیط تفکیک مورد نیاز را متناسب با ظروف کشت با اندازه های دیگر افزایش یا کاهش دهید.

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول 0/25% تریپسین و 0/53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه).

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به ظروف کشت جدید اضافه کنید.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

مراحل پاساژ: کشت ها را می توان با افزودن محیط تازه یا جایگزینی محیط حفظ کرد. روش دیگر، کشت را می توان با سانتریفیوژ با تعلیق مجدد بعدی در 10⁵×2 سلول زنده در میلی لیتر ایجاد کرد. تراکم سلولی را بین 10⁵×2 و 1×10⁶ سلول زنده در میلی لیتر حفظ کنید. اجازه ندهید بیش از 10⁶×2سلول در میلی لیتر باشد.

تعویض محیط: 2 بار در هفته

مواد برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO