ترایزول چیست؟ عملکرد، کاربرد، ساختار و انواع

فهرست مطالب نمایش

ترایزول چیست؟

ترایزول معرف پرکاربردی در آزمایشگاه‌های زیست‌شناسی مولکولی برای استخراج RNA و به میزان کمتر، DNA و پروتئین است. ترایزول نام تجاری محلولی حاوی گوانیدین تیوسیانات و فنل است که به طور مؤثر سلول‌ها را تخریب کرده و اجزای سلولی را حل می‌کند و امکان جداسازی RNA از DNA و پروتئین در یک مرحله را فراهم می‌سازد.

این محصول که در اصل توسط Invitrogen توسعه و عرضه شده و در حال حاضر تحت برند Thermo Fisher Scientific به فروش می‌رسد، برای آزمایشگاه‌های فعال در زمینه تحقیقات ژنتیکی و پروتئومی ضروری شده است.

عملکردها و کاربردها

عملکردها:

ترایزول عمدتا به عنوان یک عامل لیزکننده عمل می‌کند که پروتئین‌ها را دناتوره می‌کند. فنل و گوانیدین تیوسیانات موجود در ترایزول با هم کار می‌کنند تا سلول‌ها را تخریب کنند، نوکلئازهایی (نوکلئاز آنزیمی است که RNA یا DNA را تجزیه می‌کند) را که باعث تخریب اسیدهای نوکلئیک می‌شوند غیرفعال کرده و جداسازی فاز را تسهیل می‌بخشند. با تنظیم pH، می‌توان از ترایزول برای جداسازی RNA به فاز آبی، DNA به فاز بینابینی و پروتئین به فاز آلی استفاده کرد.

کاربردها:

استخراج RNA: ترایزول رایج‌ترین روش برای استخراج RNA با کیفیت بالا است که برای کاربردهای بعدی مانند RT-PCR، northern blotting و تعیین توالی RNA (RNA sequencing) ضروری است.
استخراج DNA: اگرچه کمتر رایج است، اما از ترایزول می‌توان برای خالص‌سازی DNA برای مطالعات ژنومی نیز استفاده کرد.
استخراج پروتئین: بخش پروتئینی به دست آمده از استخراج با ترایزول را می‌توان برای western blotting و سایر تجزیه و تحلیل‌های پروتئومی مورد استفاده قرار داد.

ساختار

ترایزول محلولی حاوی گوانیدین تیوسیانات و فنل است. گوانیدین تیوسیانات به عنوان یک عامل چگالش‌زدا (chaotropic agent) عمل کرده و پروتئین‌ها را دناتوره می‌کند و اطمینان می‌دهد که RNaseها و سایر آنزیم‌ها غیرفعال هستند. فنل که هم آب‌گریز و هم کمی اسیدی است، به جداسازی مؤثر فاز کمک می‌کند که در آن RNA، DNA و پروتئین‌ها با افزودن کلروفرم و سانتریفوژ شدن در لایه‌های مختلف جدا می‌شوند.

انواع مختلف

در حالی که ترایزول فرمولاسیون خاصی از Invitrogen/Thermo Fisher است، معادل‌های عمومی در دسترس هستند که حاوی اجزای مشابهی می‌باشند. این معادل‌ها اغلب با نام‌هایی مانند TRI reagent یا RNAiso شناخته می‌شوند و عموماً بر اساس اصل مشابهی کار می‌کنند، اما ممکن است در ترکیب شیمیایی یا غلظت خاص خود کمی متفاوت باشند.

نگهداری و حمل و نقل

به دلیل وجود فنل و گوانیدین تیوسیانات که هر دو سمی هستند و می‌توانند باعث سوختگی شوند، هنگام کار با ترایزول باید احتیاط کرد.

تجهیزات ایمنی:

همیشه از دستکش، عینک و روپوش آزمایشگاهی استفاده کنید.
برای جلوگیری از استنشاق، زیر هود آزمایشگاهی کار کنید.

نگهداری:

ترایزول باید در دمای اتاق در ظرف دربسته و به دور از نور نگهداری شود. در این شرایط برای چند ماه پایدار است.

بخش‌های آزمایشگاهی که از ترایزول استفاده می‌کنند

ترایزول عمدتا در بخش‌های آزمایشگاه اختصاصی زیست‌شناسی مولکولی و ژنتیک که در آن‌ها استخراج RNA، DNA و پروتئین به طور معمول انجام می‌شود، مورد استفاده قرار می‌گیرد. این بخش‌ها عبارتند از:

تحقیقات ژنومی: برای مطالعات مربوط به بیان ژن، تنظیم ژن و سایر کاربردهای ژنومی.
تأسیسات پروتئومیکس: برای تجزیه و تحلیل بیان پروتئین، تغییرات و فعل و انفعالات آن‌ها.
آزمایشگاه‌های تحقیقات بالینی: برای اهداف تشخیصی در مواردی که نیاز به مطالعه ویروس‌های RNA یا پروفایل بیان ژن در نمونه‌های بالینی باشد.

جایگزین‌های ترایزول

چندین جایگزین برای ترایزول جهت استخراج RNA، DNA و پروتئین از نمونه‌های بیولوژیکی در دسترس است که از نظر ایمنی، کارایی و کاربردهای خاص، تنوعی را ارائه می‌دهند. در اینجا به برخی از جایگزین‌های رایج اشاره شده است:

کیت‌های RNeasy کمپانی Qiagen: این کیت‌ها از فناوری غشاء مبتنی بر سیلیکاژل برای اتصال کارآمد و گزینشی RNA استفاده می‌کنند. آن‌ها به دلیل سهولت استفاده و توانایی در تولید RNA با کیفیت بالا که برای طیف وسیعی از کاربردها مناسب است، محبوبیت خاصی دارند.
کیت‌های RNAqueous کمپانی Ambion: این کیت‌ها نیز از روشی مبتنی بر فیلتر سیلیکا برای جداسازی RNA استفاده می‌کنند. آن‌ها به گونه‌ای طراحی شده‌اند که جایگزینی ایمن برای روش‌های استخراج با حلال‌های آلی باشند و بازده بالایی از RNA سالم ارائه دهند.
سیستم جداسازی کل RNA کمپانی Promega SV: این سیستم روشی سریع و قابل ارتقا برای خالص‌سازی کارآمد RNA از انواع بافت‌ها و نمونه‌های سلولی ارائه می‌دهد. این سیستم مزایای فناوری غشاء سیلیکا را با قابلیت ارتقای فرایند با استفاده از سانتریفوژ یا manifold خلا ترکیب می‌کند.
کیت‌های RNA مستقیم (Direct-zol) کمپانی Zymo Research: این کیت‌ها امکان استخراج RNA را مستقیماً از نمونه‌های موجود در ترایزول، بدون مرحله جداسازی فاز، فراهم می‌کنند که منجر به ساده‌سازی فرایند و کاهش اتلاف نمونه می‌شود. آن‌ها با انواع نمونه‌های مختلف از جمله سلول‌ها، بافت‌ها و مایعات بیولوژیکی سازگار هستند.
کیت MiniPrep کل RNA مونارک کمپانی NEB: این کیت جایگزین دیگری است که نه تنها بر کارایی جداسازی RNA بلکه بر سازگاری با محیط زیست با کاهش ضایعات پلاستیکی و استفاده از بسته‌بندی قابل بازیافت تأکید دارد.
جایگزین‌های بدون فنول: برای کسانی که در مورد سمیت و خطرات زیست‌محیطی مرتبط با فنل نگران هستند، چندین کیت استخراج بدون فنول در دسترس است. این کیت‌ها اغلب از دترجنت‌ها و نمک‌های چگالش‌زا (chaotropic salts) برای لیز سلول‌ها و محافظت از RNA در برابر تخریب استفاده می‌کنند.
روش‌های مبتنی بر گویچه‌های مغناطیسی: این روش‌ها از گویچه‌های مغناطیسی روکش‌دار با موادی که RNA را متصل می‌کنند، استفاده می‌کنند که امکان جداسازی سریع و تمیز را فراهم می‌سازد. این روش‌ها قابلیت ارتقا دارند و می‌توان آن‌ها را برای نیازهای با نمونه‌های حجیم (high-throughput) اتوماتیک کرد.

هر یک از این جایگزین‌ها بسته به نوع نمونه و خلوص و سلامت مورد نظر RNA، مجموعه پروتکل‌ها، کارایی‌ها و بهترین سناریوهای استفاده خود را دارد. هنگام انتخاب جایگزینی برای ترایزول، مهم است که الزامات خاص کاربردهای بعدی خود را مانند RT-PCR، آنالیز میکروآرایه یا تعیین توالی در نظر بگیرید.

جهت خرید و یا استعلام قیمت با ما تماس بگیرید یا در واتسپ پیام بزارید

02186073470

همچنین بخوانید:

مترجم: محمد صادق محمودی لرد

منبع

از این مطلب چقدر راضی بودید؟

روی ستاره کلیک کنید تا نظرتون ثبت بشه