انجام تست MTT
آزمایشگاه ژنیران در راستای خدمت رسانی به دانشجویان، محققین و مراکز تحقیقاتی، میزان سمیت مواد مختلف را با استفاده از معرف های معتبر و روش اسپکتروفوتومتری مورد سنجش قرار می دهد. تست های سنجش سمیت مواد (تست MTT)، دارو ها، نانوذره و … زیر نظر کادر مجرب و باتجربه آزمایشگاه ژنیران به انجام رسیده و نتایج با دقت بالا در کمترین ارائه می گردد.
معرف های مختلف که برای سنجش زنده مانی سلول ها مورد استفاده قرار می گیرند؛ MTT، XTT، LDH، رزازورین (Resazurin) و … می باشند. تجهیزات سیستم اتاق کشت آزمایشگاه ژنیران به روز و پیشرفته بوده و همچنین برای انجام تست های مختلف از مواد و کیت های با برند معتبر استفاده می گردد.
بررسی سمیت مواد به روش MTT Assay و یا روش های مشابه بر روی سلول های جانوری در راستای تأیید اثر یک دارو در کشندگی یا غیرکشندگی آن و همچنین دستیابی به دز مناسب کشندگی انجام می پذیرد.
🔴 زمان تحویل: 7 روز کاری 🔴 نحوه محاسبه قیمت:
نحوه‌ی تحویل پروژه:
- نتایج اسپکتروفوتومتری تست MTT توسط دستگاه الایزاریدر Epoch به انجام رسیده و داده ها در فایل اکسل به همراه IC50 و نمودار Viability ارائه می گردد.
- در صورت تقاضا تفسیر تست MTT به شکل یک جلسه تئوری آموزش داده می شود.
خدمات جانبی:
آزمایشگاه ژنیران با دربرداشتن تجهیزات و امکانات به روز در زمینه کشت سلول، رده های سلولی مختلف جانوری را در بانک سلولی خود داشته و در صورت نیاز، از رده های سلولی موجود تست های بررسی های سنجش سمیت مواد (MTT assay) را به انجام می رساند. همچنین با توجه به امکانات آزمایشگاه ژنیران در زمینه ژنتیک مولکولی و پروتئین، علاوه بر بررسی سمیت یک دارو، تأثیرات مختلف مولکولی آن قابل انجام است. برای کسب اطلاعات بیشتر از خدمات مختلف آزمایشگاه ژنیران، موارد زیر کلیک کنید:
در رابطه با تست MTT و تکنیک های بررسی سمیت مواد بر روی رده های سلولی با روش های MTT، XTT، LDH و Resazurin بیشتر بدانیم…
قبل از ارائه یک ترکیب سنتزی یا طبیعی به عنوان دارو، باید تست های مختلفی جهت سنجش تأثیرات مختلف آن بر روی سلول های هدف انجام پذیرد. یکی از تست های اولیه برای بررسی اثر کشندگی یک ترکیب ناشناخته، بررسی سمیت آن در سیستم in-vitro می باشد. چرا که اگرچه یک ترکیب از نظر مولکولی شناخته شده و تأثیرات آن قابل حدس باشد؛ بررسی تأثیر واقعی آن در سیستم زنده همچنان قابل بحث است.
تکنیک های سنجش سمیت مواد در راستای بهینه سازی ابتدایی دارو ها ارائه می گردد. برخی اوقات یک ترکیب به دلیل خاصیت کشندگی آن به عنوان داروی بیماری هایی چون سرطان ارائه می گردد تا بتواند در از بین بردن سلول های سرطانی نقش ایفا کند و همچنین برخی اوقات ترکیبات باید هیچ اثر سمیتی روی سلول های جانوری نداشته باشند تا بتوانند به عنوان یک دارو معرفی شوند.
هر دو دسته این ترکیبات معرفی شده، در ابتدای مسیر با تست های بررسی سمیت مورد سنجش قرار می گیرند. در تکنیک های مختلف سنجش سمیت مواد، اساس کار یکسان بوده و در نهایت معرف های مختلف که نشانگر سلول های زنده هستند مورد استفاده قرار می گیرند.
به عنوان مثال در تکنیک MTT، از پودر MTT به عنوان نشانگر سلول های زنده استفاده می شود. انجام تست MTT بدین شکل است که پس از تیمار سلول ها، محلول MTT به سلول ها اضافه شده و به درون میتوکندری سلول های زنده نفوذ می کند. زمانی که MTT به درون میتوکندری وارد شود، در آن جا بلور های فورمازان تشکیل می دهد.
هرچقدر میزان بلور های فورمازان تشکیل شده بیشتر باشد به همان میزان نشان دهنده سلول های زنده بیشتر است. مسئله قابل توجه که موجب گشته ترکیب MTT یک فاکتور مناسب برای بررسی زنده مانی (Viability) در سلول های یوکاریوتی شود؛ کروموفور بودن آن و قابلیت تمییز دادن بین سلول های زنده و مرده می باشد.
این ترکیب در حالت عادی زرد رنگ بوده و زمانی که در مجاورت میتوکندری قرار می گیرد، توسط دهیدروژناز های فعال میتوکندریایی با دریافت پروتون کاهش یافته و بلور های بنفش رنگ تشکیل می دهد. همچنین ترکیب MTT قبل از کاهش در محدوده 300 الی 400 نانومتر جذب داشته و پس از کاهش در محدوده 500 الی 600 نانومتر جذب خواهد داشت و بیشترین جذب آن در محدوده طول موجی 570 نانومتر می باشد.
لذا مجموعاً با همین تفاسیر، ترکیباتی که خاصیت کروموفورری داشته و در محدوده خاص طول موج جذب نوری داشته باشند، در صورتی که علاوه بر آن قابلیت تمییز بین سلول های زنده و مرده داشته باشند، می توانند موارد مناسبی برای بررسی زنده مانی سلول ها باشند و در تست بررسی سمیت مواد به کار آیند.
انتخاب فاکتور هایی دیگر علاوه بر فاکتور MTT برای بررسی سمیت مواد، بدین جهت است که برخی اوقات ترکیب MTT با ماده مؤثره‌ای که در جهت بررسی سمیت آزمایش می شود تداخل داشته و در نتیجه تست MTT نتایج کاذب ارائه دهد. ترکیباتی مانند LDH، XTT و رزازورین (Resazurin) جایگزین های مناسبی برای MTT می باشند و فقط باید دقت داشت هریک شرایط خاص خود را داشته و جذب نوری متفاوتی خواهند داشت.
آزمایشگاه ژنیران انواع تست های سمیت سنجی مواد و ترکیبات را به انجام رسانده و در صورتی که ترکیب MTT با ماده مؤثره تداخل داشته باشد، زیر نظر کادر مجرب و با تجربه از فاکتور های جایگزین بهره می برد.
تفسیر نتایج تست MTT یکی از مهمترین بخش های تست های بررسی سمیت مواد می باشد. باید توجه داشت که نتایج تست MTT به خوبی ارزیابی شده و برای هریک از دارو ها نمودار Viability (نرخ زنده مانی سلولی) در دز های مختلف ترسیم شده و نسبت به نمودار کنترل مقایسه شود.
روش آنالیز نتایج تست های سنجش زنده مانی مانند MTT Assay بدین شکل است که پس از خوانش پلیت با دستگاه الایزا ریدر، از جذب خانه های تکرار شده برای هر دز میانگین گرفته می شود. باید توجه داشت که میزان جذب هر چاهک از میزان جذب چاهک بلانک کم شود(عموماً این کار توسط خود دستگاه الایزا ریدر انجام می شود).
در نهایت میانگین جذب هر دز به میزان جذب کنترل تقسیم شده و در 100 ضرب می شود. اعداد بدست آمده نشان دهنده درصد نرخ زنده مانی یا همان Viability می باشد. سپس نرخ زنده مانی هر یک از غلظت ها به شکل نمودار ترسیم شده و بر طبق نمودار تفسیر و آنالیز نتایج انجام می پذیرد.
آزمایشگاه ژنیران پس از انجام تست MTT، آنالیز های مربوطه و تفسیر نتایج MTT Assay را انجام داده و در صورت نیاز جلسات عملی و تئوری جهت یادگیری انجام تست های سنجش سمیت مواد و تفسیر نتایج MTT Assay برگزار می کند. برای کسب اطلاعات از آموزش نحوه انجام انواع تست های سنجش سمیت مواد بر روی رده های سلولی کلیک کنید.
روش انجام تست MTT برای تست سمیت سلولی
آزمون سمیت سلولی مطابق استاندارد ISO10993-5 و به سه روش آزمون NRU، آزمون CFU و آزمون MTT و آزمون XTT انجام میگیرد. متداول ترین روش در ارزیابی سمیت سلولی، سنجش بقای سلولی به روش MTT یا (۳-(۴,۵-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) است.
در روش MTT، جهت بررسی سمیت سلولی یک فلاسک L929 کانفلوئنس را زير هود برده و در شرايط كاملاً استريل محيط رويي سلول را خالي نموده، سپس سطح سلول ها را با PBS شست و شو داده و سپس به آن تريپسين افزوده تا سلول‌ها از حالت كشيده و فيبروبلاستيك خارج شده و به شكل كروي در آيند.
سپس محيط ۱۰ % FBS دار (سرم جنین گاوی) روي آنها ريخته تا تريپسين خنثي شود. پس از آن سلول ها را درون لوله فالكون ريخته با دور rpm 1200 به مدت ۵ دقيقه سانتريفوژ مي شوند كه سلول ها از محيط جدا شده و در كف فالكون قرار گيرند.
سپس لوله فالكون را از سانتريفوژ خارج كرده و محيط رويي آن را دور ریخته و روي آن محيط ۱۰ % FBS دار ريخته و توسط لام نئوبار شمارش سلولی انجام می شود. به ازای هر خانه یک پلیت ۲۴ خانه ای به میزان ۱۰۴*۵ سلول در نظر گرفته می شود.
نمونه های استریل نیز در شرایط استریل در مرکز هر خانه از پلیت قرار داده و سوسپانسیون سلولی به آن اضافه می شود و به مدت ۲۴ ساعت در انكوباتور C37 و Co2 5 % قرار داده می شود. طبق استاندارد ISO 10993-5 پس از ۲۴ ساعت، محیط رویی سلول را برداشته و با PBS لایه سلولی شست و شو داده می شود و سپس محلول MTT (1mg/ml) به میزان کافی روی لایه سلولی ریخته می شود.
پلیت کشت به مدت ۳-۵ ساعت درون انکوباتور در تاریکی قرار می گیرد. پس از مدت زمان گفته شده سلول ها با PBS شست و شو می شود تا MTT واکنش نکرده خارج شود. محصول فرمازان ایجاد شده توسط حلال ایزوپروپانل حل می شود و جذب هر خانه در طول موج ۵۴۰ نانومتر خوانده می شود. میزان مانایی سلول (Cell Viability) حاصل کسر جذب هر نمونه بر نمونه کنترل (ظرف پلی استایرن) است.
محاسبه درصد سلولهای زنده در تست MTT
درصد سلولهای زنده یا میزان بقای سلولی در تست MTT، بر اساس رابطه زیر محاسبه می‌گردد:
۱۰۰ × جذب متوسط نمونه‌های کنترل / جذب متوسط نمونه‌های تیمار شده = درصد سلولهای زنده
سلام یع تست mtt میخواستم واسم انجام بدید لطفا قیمت بهم بدید
جهت استعلام قیمت و جزییات با ما تماس بگیرید
در رابطه با هزینه تست Mttو live_deadو چسبندگی سلول سوال داشتم.
جهت استعلام قیمت و جزئیات با ما تماس بگیرید
سلام وقتتون بخیر
هزینه انجام تست MTT و آنالیز آن چقدر هست ؟و آیا با هر رده سلولی انجام می دهید؟
سلام، جهت اطلاع از قیمت ها و جزئیات با ما تماس بگیرید
سلام وقتتون بخیر برای انجام تست mtt رده سلولیct26 و ۴گروه نانوذره با ۶غلظت مختلف و ۳تکرار هزینش چقدر میشه؟
سلام هزینه شما حدودا بین ۱۰ تا ۱۵ میلیون تومان برآورد شده در این تاریخ. جهت اطلاعات بیشتر و جامع تر با ما تماس بگیرید
با سلام
سلول human gingival fibroblast هم برای سمیت سلولی دارید؟
بله موجود است. رده های سلولی ما را از منو، قسمت فروش رده سلولی میتوانید مشاهده کنید
سلام،خسته نباشید
هزینه ی تست mtt در سال ۱۴۰۲ میخواستم بدونم.
سلام، جهت استعلام قیمت لطفا با ما تماس بگیرید
ببخشید هزینه تست mtt چقدر هست؟؟
با سلام، جهت مشاوره و استعلام قیمت با ما تماس بگیرید
سلام خسته نباشین
ببخشید می خواستم ببینم اگر دارو تاثیر نداشته باشه میشه طوری مشخص کرد که دارو اثر داشته؟
سلام دوست عزیز سوال شما اصلا واضح نیس.
اگر دارویی تاثیر نداشته باشد در نتیجه سلول ها زنده میمانند. اگر دارو اثر کند سلول ها خواهند مرد البته در غلظت های متفاوت دارو زده خواهد شد.
هزینه تست MTT ؟
سلام بسته به پروژه شما از ۲ تا ۳ونیم میلیون تومان است.