ترایزول (Trizol)

راهنمای خرید ترایزول:

محلول شیمیایی که در استخراج RNA ، DNA و پروتئین ها از سلول نقش دارد را ترایزول گویند.روش نگه داری آن به دلیل حساسیت به نور ، در ظرف های شیشه ای تیره می باشد که در نتیجه در دمای کم تر از اتاق باید این ماده قرار گیرد. ترایزول با فرمول مولکولی C2H3N3 وبه دلیل دارا بودن این خاصیت مولکولی جزو ترکیبات هتروسیکلیک می باشد.

روش کار ترایزول بدین صورت است که باعث تجزیه سلول می شود اما در روند از بین بردن RNA دخالت ندارد بلکه نظم و یکپارچگی RNA را می تواند حفظ کند.

نکاتی که باید به آن توجه نمود این است که به دلیل بوی فنل شدید و به دلیل اینکه ترایزول حاوی کلروفرم می باشد باید از استفاده آن دقت کامل را داشته باشد و در نتیجه استفاده از دستکش آزمایشگاهی به شدت توصیه میشود.Trizol یک ترکیب خطرناک است که اغلب در استخراج DNA-RNA استفاده می شود.

معرف Trizolیکپارچگی RNA را به دلیل مهار بسیار مؤثر فعالیت RNase حفظ می کند و در عین حال سلول ها را مختل می کند و اجزای سلول را در طول همگن سازی نمونه حل می کند. سادگی روش TRIzol™ Reagent امکان پردازش همزمان تعداد زیادی از نمونه ها را فراهم می کند. این محلول تک فازی برای جداسازی بخش های جدا شده از RNA، DNA و پروتئین ها از نمونه های سلولی و بافتی انسان، حیوان، گیاه، مخمر یا باکتری طراحی شده است. RNA کل جدا شده با معرف TRIZol عاری از آلودگی پروتئین و DNA است.

ترایزول اگر دارای pH پایین باشد باعث جداسازی RNA از پروتئین و DNA می شود اما اگر ترایزول دارای pH بالا باشد باعث جدا شدن هم RNA و هم DNA می شود. مواد تشکیل دهنده ترایزول حاوی گوانیدین تیوسیانات و فنل می باشد به یک مصرف مبتنی بر اسید گانیدینیوم فنل تعریف می شود که برای تخریب پروتئین و اسید های نوکلئوییک بکار می رود.

در طول همگن سازی یا لیز بافت، معرف TRIZol یکپارچگی RNA را حفظ می کند، در حالی که سلول ها را مختل کرده و اجزای سلول را حل می کند. از ترایزول برای انواع RNA ها از جمله : micRNA ، RNA های مرتبط با پیوی یا RNA های مداخله گر کوچک و درون زا.

معرف TRIZol به شما امکان می دهد RNA، DNA و پروتئین ها را از یک نمونه به صورت متوالی رسوب دهید. پس از همگن کردن نمونه با معرف TRIzol™، کلروفرم اضافه می شود و هموژنه به یک لایه آبی شفاف (حاوی RNA)، یک لایه مرزی، و یک لایه پایین آلی قرمز (حاوی DNA و پروتئین) جدا می شود. RNA از لایه آبی با ایزوپروپانول رسوب می کند.

رسوب DNA از سطح مشترک آلی با اتانول انجام می شود. در نهایت، پروتئین از رویی فنل-اتانول با ایزوپروپانول رسوب می‌کند. RNA، DNA یا پروتئین رسوب‌شده برای حذف آلاینده‌ها شسته می‌شود

نکات مهم قبل از انجام آزمایش :

• سرد نگه داشتن نمونه های حاوی RNA و معرف ها برای جلوگیری از آسیب و تخریب RNA ها
• استفاده از محلول های ضد عفونی کننده که حاوی RNase باشند قبل از انجام آزمایش
• برای عدم آسیب به فرد آزمایش کننده استفاده از ماسک و دستکش توصیه می شود.
• قرار گرفتن در معرض Trizol می تواند یک خطر جدی برای سلامتی باشد. قرار گرفتن در معرض می تواند منجر به سوختگی های شیمیایی جدی، زخم های دائمی و نارسایی کلیه شود.

طریقه مصرف:

بعد از افزودن ترایزول، نمونه را سانتریوفیوژ کرده ، سپس نمونه به 2 فاز آبی و آلی تقسیم می شود که فقط باید فاز آبی که حاوی RNA می باشد را نگه داشت.

توجه:

با توجه به نوع نمونه (خون، سلول ، بافت) مراحل و توجه نکات می تواند متغیر باشد.

جهت ارزیابی RNA استخراج شده می توان از 2 روش استفاده نمود:

1. ارزیابی کیفی (integrity): الکتروفورز
2. ارزیابی کمی مقدار (gravitity) و خلوص(purity): نانودراپ اسپکتوفتومتری

در نتیجه تایید کیفیت RNA می توان برای دیگر آزمایشات ار آن برای سنتز cDNA  استفاده نمود.

مشاهده این محصول در سایت سیگما

مشاهده لیست کامل مواد آزمایشگاهی