اگر هدف از تیمار، از بین بردن سلول‌های سرطانی باشد، تعداد بالاتر سلول‌های مرده نشانه‌ی اثر مثبت تیمار است.
اگر هدف بررسی بقا و عدم سمیت تیمار باشد، تعداد بالاتر سلول‌های زنده نتیجه‌ی بهتری است.
بهترین روش برای تحلیل، بررسی نسبت سلول‌های زنده به مرده در شرایط تیمار و کنترل است، نه فقط تعداد کلی هر یک.

مشکل تجمع سلول‌ها و افتادن آن‌ها روی هم هنگام رنگ‌آمیزی با آکریدین اورنج یک چالش رایج است که می‌تواند بر دقت و کیفیت تجزیه و تحلیل نمونه‌ها تأثیر بگذارد. برای رفع این مشکل، چند راهکار مؤثر وجود دارد که می‌توانید آن‌ها را امتحان کنید:

۱. بهبود روش افزودن رنگ
افزودن آرام رنگ: به جای ریختن مستقیم رنگ روی سلول‌ها، می‌توانید رنگ را به آرامی و به صورت قطره‌قطره اضافه کنید تا فشار کمتری به سلول‌ها وارد آید. این کار می‌تواند از تجمع و تخریب ساختار سلولی جلوگیری کند.
۲. استفاده از ماتریس پلیمری
پوشش دهی با ماتریس: برخی از آزمایشگاه‌ها از یک لایه نازک ماتریس پلیمری برای پوشش دادن سطح قبل از رنگ‌آمیزی استفاده می‌کنند. این ماتریس می‌تواند به سلول‌ها کمک کند تا در جای خود باقی بمانند و کمتر تحت تأثیر افزودن مواد شیمیایی قرار گیرند.
۳. تغییر در غلظت رنگ
کاهش غلظت رنگ: بررسی کنید که آیا می‌توانید غلظت رنگ آکریدین اورنج را کاهش دهید. گاهی اوقات استفاده از غلظت بالای رنگ می‌تواند به سلول‌ها فشار وارد کند و باعث تجمع آن‌ها شود.
۴. استفاده از فیکساتیو
فیکس کردن نمونه: قبل از افزودن رنگ، ممکن است لازم باشد که سلول‌ها را با استفاده از ماده فیکس‌کننده مانند پارافرمالدئید فیکس کنید. فیکس کردن سلول‌ها می‌تواند به حفظ ساختار و جلوگیری از تخریب آن‌ها کمک کند.

برای رنگ‌آمیزی و آزمایش دارویی روی سلول‌ها، اطمینان حاصل کنید که:

محیط کشت را قبل از افزودن دارو تعویض کنید.
سلول‌ها را با PBS شستشو دهید تا پاکیزگی نمونه حفظ شود.
برای مشاهده فلورسنس، از پلیت مناسب میکروسکوپ استفاده کنید.

خوشحالیم که مفید بوده

سلام
وقت بخیر
شدت نور دوربین را می توانید پایین بیاورید تا نور های اضافی حذف شود.

برای ادغام تصاویر، ابتدا عکس در دو فیلتر به شکل مجزا گرفته شده و سپس در نرم افزار ImageJ ادغام انجام می شود. برای داربست هم به همین شکل است اما باید توجه داشت از داربست هایی در این تکنیک می توان استفاده نمود که ضخامت کمی داشته باشند تا در عکس برداری سلول ها رو هم نیفتند.

سلام، ممنون دوست عزیز.