دیدگاه‌ها برای: جداسازی نوتروفیل های انسانی https://www.geniranlab.ir/%d8%ac%d8%af%d8%a7%d8%b3%d8%a7%d8%b2%db%8c-%d9%86%d9%88%d8%aa%d8%b1%d9%88%d9%81%db%8c%d9%84-%d9%87%d8%a7%db%8c-%d8%a7%d9%86%d8%b3%d8%a7%d9%86%db%8c/ آزمایشگاه ژنتیک،بیوتکنولوژی،بیوانفورماتیک|کارآموزی|مهارت آموزی|خدمات|پایان نامه Mon, 24 Jun 2024 07:41:01 +0000 hourly 1 https://wordpress.org/?v=6.8.8 توسط: کاربر ژنیران https://www.geniranlab.ir/%d8%ac%d8%af%d8%a7%d8%b3%d8%a7%d8%b2%db%8c-%d9%86%d9%88%d8%aa%d8%b1%d9%88%d9%81%db%8c%d9%84-%d9%87%d8%a7%db%8c-%d8%a7%d9%86%d8%b3%d8%a7%d9%86%db%8c/comment-page-1/#comment-16514 Mon, 24 Jun 2024 07:41:01 +0000 https://www.geniranlab.ir/?p=6770#comment-16514 در پاسخ به کاربر ژنیران.

خیلی ممنون از پاسخ جامع و مفیدتان

]]> توسط: Farbod Esfandi https://www.geniranlab.ir/%d8%ac%d8%af%d8%a7%d8%b3%d8%a7%d8%b2%db%8c-%d9%86%d9%88%d8%aa%d8%b1%d9%88%d9%81%db%8c%d9%84-%d9%87%d8%a7%db%8c-%d8%a7%d9%86%d8%b3%d8%a7%d9%86%db%8c/comment-page-1/#comment-16066 Wed, 12 Jun 2024 08:53:12 +0000 https://www.geniranlab.ir/?p=6770#comment-16066 در پاسخ به Farbod Esfandi.

جداسازی نوتروفیل‌های انسانی با استفاده از دکستران

جداسازی نوتروفیل‌ها از خون محیطی انسان یکی از مراحل مهم در تحقیقات ایمونولوژی و سلولی است. دکستران به عنوان یک ماده مهم در جداسازی نوتروفیل‌ها به کار می‌رود. در اینجا به توضیح استفاده از دکستران در این پروتکل و نحوه تهیه محلول دکستران می‌پردازیم.

نوع دکستران استفاده شده

در بیشتر پروتکل‌های جداسازی نوتروفیل‌های انسانی، از دکستران با وزن مولکولی 500,000 (Dextran T-500) استفاده می‌شود. این نوع دکستران به دلیل وزن مولکولی بالا، موثرترین گزینه برای رسوب کردن گلبول‌های قرمز و جداسازی نوتروفیل‌ها است.

آیا با همه نوع دکستران قابل انجام است؟

به طور کلی، جداسازی نوتروفیل‌ها با استفاده از دکستران به وزن مولکولی آن بستگی دارد. دکستران با وزن مولکولی بالا (مانند 500,000 یا بالاتر) به طور موثرتری گلبول‌های قرمز را رسوب می‌دهد. استفاده از دکستران با وزن مولکولی پایین‌تر ممکن است کارآیی جداسازی را کاهش دهد.

نحوه تهیه محلول دکستران

مواد لازم:

دکستران T-500
NaCl (محلول نمکی)
آب مقطر
تجهیزات آزمایشگاهی مانند ترازوی دقیق، همزن، و ظروف استریل

تهیه محلول دکستران:

تهیه محلول نمکی: یک محلول نمکی 0.9% (9 گرم NaCl در 1 لیتر آب مقطر) تهیه کنید.
وزن‌کشی دکستران: مقدار مناسب دکستران T-500 را وزن کنید. برای تهیه محلول 6%، 60 گرم دکستران در 1 لیتر محلول نمکی لازم است.
حل کردن دکستران: دکستران وزن شده را به آرامی به محلول نمکی اضافه کنید و به آرامی هم بزنید تا دکستران کاملاً حل شود. این فرآیند ممکن است چند ساعت طول بکشد، بنابراین بهتر است از یک همزن مغناطیسی استفاده کنید.
استریل کردن: پس از حل شدن دکستران، محلول را از طریق فیلتر 0.22 میکرونی عبور دهید تا استریل شود. محلول استریل شده را در ظروف استریل نگهداری کنید.

پروتکل جداسازی نوتروفیل‌ها:

خون گیری: از فرد داوطلب خون گرفته و در لوله‌های حاوی آنتی‌کوآگولانت (مثل EDTA) جمع‌آوری کنید.
اضافه کردن دکستران: به حجم مساوی خون، محلول دکستران 6% اضافه کنید و به آرامی مخلوط کنید.
رسوب دادن: مخلوط خون و دکستران را در دمای اتاق به مدت 30-45 دقیقه به حال خود بگذارید تا گلبول‌های قرمز رسوب کنند.
برداشتن لایه پلاسمایی: پس از رسوب گلبول‌های قرمز، لایه بالایی (پلاسمای حاوی نوتروفیل‌ها) را به آرامی برداشته و به لوله جدیدی منتقل کنید.
سانتریفیوژ کردن: پلاسمای حاوی نوتروفیل‌ها را در 400-500 g به مدت 10-15 دقیقه سانتریفیوژ کنید تا نوتروفیل‌ها رسوب کنند.
شستشو و تعلیق: رسوب نوتروفیل‌ها را با بافر مناسب (مثل PBS) شستشو داده و دوباره در بافر مناسب تعلیق کنید.

]]> توسط: کاربر ژنیران https://www.geniranlab.ir/%d8%ac%d8%af%d8%a7%d8%b3%d8%a7%d8%b2%db%8c-%d9%86%d9%88%d8%aa%d8%b1%d9%88%d9%81%db%8c%d9%84-%d9%87%d8%a7%db%8c-%d8%a7%d9%86%d8%b3%d8%a7%d9%86%db%8c/comment-page-1/#comment-15287 Sun, 19 May 2024 09:07:58 +0000 https://www.geniranlab.ir/?p=6770#comment-15287 در پاسخ به کاربر ژنیران.

خیلی ممنون از پاسخ گویی شما،
اگر امکانش هست درمورد دکستران استفاده شده در پروتکل هم توضیح بفرمایید، از کدام نوع دکستران استفاده شده؟ با همه نوع دکستران قابل انجام هست؟ نحوه تهیه محلول دکستران رو هم بفرمایید.
خیلی ممنون از پاسخ گویی شما

]]> توسط: Farbod Esfandi https://www.geniranlab.ir/%d8%ac%d8%af%d8%a7%d8%b3%d8%a7%d8%b2%db%8c-%d9%86%d9%88%d8%aa%d8%b1%d9%88%d9%81%db%8c%d9%84-%d9%87%d8%a7%db%8c-%d8%a7%d9%86%d8%b3%d8%a7%d9%86%db%8c/comment-page-1/#comment-15133 Tue, 14 May 2024 14:48:06 +0000 https://www.geniranlab.ir/?p=6770#comment-15133 در پاسخ به Farbod Esfandi.

جداسازی نوتروفیل‌ها با استفاده از محلول Percoll یکی از روش‌های متداول و مؤثر برای جداسازی این نوع سلول‌ها از نمونه‌های خون است. Percoll یک ماده‌ی گرادیان چگالی است که امکان جداسازی سلول‌ها بر اساس چگالی آن‌ها را فراهم می‌کند. در اینجا یک پروتکل اساسی برای جداسازی نوتروفیل‌ها با استفاده از Percoll آورده شده است:

مواد لازم:
خون کامل آنتی‌کواگوله شده
محلول دکستران برای صاف کردن خون
محلول سدیم سیترات یا EDTA به عنوان آنتی‌کواگولانت
محلول Percoll
بافر PBS (فسفات بافر سالین)
سانتریفیوژ
مراحل جداسازی:
آماده‌سازی خون: خون کامل را با آنتی‌کواگولانت مانند EDTA یا سدیم سیترات مخلوط کنید.

صاف کردن خون: خون را با دکستران مخلوط کنید (معمولاً ۳% دکستران در مقدار کافی برای رقیق کردن خون استفاده می‌شود) و اجازه دهید برای حدود ۳۰ تا ۴۵ دقیقه در دمای اتاق قرار بگیرد تا سلول‌های قرمز خون ته‌نشین شوند.

جمع‌آوری لایه لوکوسیت: لایه فوقانی حاوی پلاسما و لوکوسیت‌ها را جمع‌آوری کنید.

سانتریفوژ با Percoll: محلول Percoll را آماده کنید. معمولاً گرادیان‌های چگالی 45% و 65% برای جداسازی نوتروفیل‌ها استفاده می‌شود. لایه‌های لوکوسیتی جمع‌آوری شده را بر روی گرادیان Percoll قرار دهید و سپس سانتریفیوژ کنید (معمولاً در حدود ۳۰ دقیقه با سرعت ۴۰۰ تا ۵۰۰ xg).

جمع‌آوری نوتروفیل‌ها: پس از سانتریفوژ، نوتروفیل‌ها معمولاً در فاصله بین لایه‌های 45% و 65% قرار می‌گیرند. این لایه را به آرامی جمع‌آوری کنید.

شستشو: نوتروفیل‌های جمع‌آوری شده را با PBS شستشو دهید و دوباره سانتریفیوژ کنید تا تمامی باقیمانده Percoll پاک شود.

استفاده از نوتروفیل‌ها: نوتروفیل‌های تمیز شده آماده استفاده در آزمایش‌های بیولوژیکی یا کشت سلولی هستند.

این پروتکل نقطه شروع خوبی برای جداسازی نوتروفیل‌ها است، اما ممکن است بر اساس نوع نمونه و نیازهای خاص تحقیق، تنظیماتی لازم باشد.

]]> توسط: کاربر ژنیران https://www.geniranlab.ir/%d8%ac%d8%af%d8%a7%d8%b3%d8%a7%d8%b2%db%8c-%d9%86%d9%88%d8%aa%d8%b1%d9%88%d9%81%db%8c%d9%84-%d9%87%d8%a7%db%8c-%d8%a7%d9%86%d8%b3%d8%a7%d9%86%db%8c/comment-page-1/#comment-10599 Mon, 25 Dec 2023 18:32:08 +0000 https://www.geniranlab.ir/?p=6770#comment-10599 سلام وقت بخیر. میخواستم پروتکل جداسازی نوتروفیل با محلول percoll رو بدونم

]]>