آنالیز Sanger Sequencing

آنالیز Sanger Sequencing

تعیین توالی DNA از اساسی ترین تکنیک های موجود در زمینه علم زیست شناسی مولکولی است که در زمینه های تشخیص طبی، نانوتکنولوژی، بیوانفورماتیک و در زمینه های میکروبیولوژی از اهمیت خاصی برخوردار است. در اینجا مختصری در مورد توالی یابی سنگر توضیح خواهیم داد.

این تکنیک بواسطه سنگر و همکارانش در اواسط 1970 ابداع گردید. تکنیک سنگر که با نام خاتمه زنجیره DNA نیز شناخته می شود بر مبنای خاتمه رشته دی اکسی نوکلئیک اسید توسط DNA پلی مراز عمل می کند که از نوکلئوتید های ویژه ای به نام ddNTPs (dideoxynucleotids) استفاده می کند که فاقد گروه OH بر روی کربن 3 هستند و اگر در ساختار یک اسید نوکلئیک قرار گیرند، سنتز این زنجیره خاتمه یافته و دیگر بلندتر نخواهد شد. این نوکلئوتیدها با مواد رادیواکتیو برچسب گذاری می شوند. در این روش به یک DNA تک رشته ای به عنوان الگو نیاز داریم. چهار لوله آزمایش مختلف برمیداریم و همه ی مواد مورد نیاز برای همانندسازی را به داخل هر چهار لوله اضافه می کنیم. در هر لوله آزمایش علاوه بر نوکلئوتیدهای طبیعی (dNTP)، یک نوع ddNTP خاص قرار داده می شود. از آنجایی که نسبت مقادیر نوکلئوتیدهای طبیعی (dNTP) بیشتر از ddNTP است و آنزیم پلیمراز، ddNTP ها را بطور تصادفی به زنجیره در حال ساخت اضافه می کند، در نتیجه محصول هر لوله ی آزمایش قطعاتی با اندازه های مختلف است که هر محصول به یک ddNTP خاص موجود در آن لوله ختم می شود. در نهایت این قطعات با الکتروفورز مویین از همدیگر تفکیک می شوند یا بر روی ژل آکریل آمید ران می شود که از طریق اتورادیوگراف بر روی ژل ظاهر می شوند. برای بدست آوردن توالی DNA، ddNTP های موجود در انتهای قطعات از پایین به بالا خوانده می شود و مکمل آنها نوشته می شود که مشابه با توالی قطعه مورد نظر می باشد.

از این مطلب چقدر راضی بودید؟

روی ستاره کلیک کنید تا نظرتون ثبت بشه

4.4 / 5. تعداد رای دهندگان: 13

تا حالا امتیازی برای این مطلب ثبت نشده؛ با ثبت نظرتون مارو خوشحال می‌کنید

8 دیدگاه برای “آنالیز Sanger Sequencing

  1. کاربر ژنیران گفته:

    باسلام و خسته نباشید میشه نحوه تفسیر جواب رو ازروی شکل برام توضیح بدید

    • Admin گفته:

      سلام
      هر نوکلئوتیدی که در توالی وجود داشته باشد میتواند با دی دی ان تی پی های متصل به فلوئورسنت باند شود . بدین ترتیب هر توالی با هراندازه ای مشخص میشود که چه نوکلئوتیدی چه هویتی دارد در نهایت بر روی ژل برده میشود و تفسیر خواهد شد.

    • Admin گفته:

      سلام دوست عزیز
      در صورت تشخیص پزشک متخصص ژنتیک در آزمایشگاه تشخیصی ژنتیک، شما میتوانید تست را در زمانی که پزشک مناسب میداند انجام دهید.

    • Admin گفته:

      سلام دوست عزیز
      توالی یابی سنجر یک روش گلد استاندارد در سکانس کردن یا همان پیدا کردن نقشه ژنی است. با مشخص شدن نقشه دقیق ژنی میتوان از غالب بیماری های ژنتیکی در ژنوم یک فرد اطلاع یافت.در حال حاضر روش NGS روش جدید تری نسبت به سنگر است.

    • Admin گفته:

      سلام دوست عزیز سنگر یک روش گلد استاندارد برای توالی یابی است که میتواند نقشه ژنی را مشخص کند .

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *