• به منظور رشد و تکثیر رده های مختلف سلولی، از تکنیک پاساژ دادن و یا ساب کالچراستفاده میشود.
• مناسبترین کانفلوئنسی برای پاساژ دادن، کانفولوئنسی ۷۰ الی ۸۰ درصد می باشد.
• ابتدا محیط کشت که حاوی سلولهای مرده و خرده های سلولی است باید از فلاسک خارج شود.
• سپس سلولهای زنده که به کف فلاسک چسبیده اند، با بافر فسفات سالین شسته می شوند.
• برای جدا کردن این سلولها از کف ظرف از ترکیب دوماده تریپسین و EDTA استفاده می شود.
• پس از افزودن تریپسین/EDTA ، فلاسک به مدت ۲ الی ۵ دقیقه داخل انکوباتور قرار می گیرد.
• همانطور که مشاهده می شود بیشتر سلول ها از کف جدا شده و تعداد کمی چسبیده باقی مانده اند.
• با استفاده از چند ضربه ملایم، سلول هایی که هنوز چسبیده اند جدا می گردند.
• با استفاده از بافر فسفات سالین، علاوه بر رقیق نمودن تریپسین، سلول های جدا شده به داخل یک فالکون انتقال داده میشوند.
• پس از سانتریفیوژ با دور ۱۵۰۰ آر پی ام به مدت ۵ الی ۱۰ دقیقه، رسوب سلولی ته فالکون تشکیل می گردد.
• سپس مایع رویی که شامل بافر فسفات سالین و تریپسین است باید خارج شوند.
• در این مرحله با افزودن مقدار کمی محیط کشت روی سلولها و پیپتاژ نمودن آنها، سلولها در محیط کشت پخش میشود.
• سپس سلولها وارد یک فلاسک بزرگتر شده و در مقدار بیشتری محیط مناسب، کشت داده می شود.
• در نهایت بعد از نوشتن تاریخ پاساژ و نام رده سلولی بر روی فلاسک، آنرا در انکوباتور با دمای ۳۷ درجه سانتی گراد و co2 5% نگه داری میشود.

1
نظرات شما

avatar
1 سرنوشته دیدگاه
0 پاسخ‌های سرنوشته
0 دنبال کنندگان
 
کامنت با بیشترین بازخورد
برترین عنوان کامنت
1 Comment authors
masoud soltani Recent comment authors

این سایت از اکیسمت برای کاهش هرزنامه استفاده می کند. بیاموزید که چگونه اطلاعات دیدگاه های شما پردازش می‌شوند.

  عضویت  
جدیدترین قدیمی ترین محبوب ترین
مطلع کردن
masoud soltani
Admin
masoud soltani

از مطالب آموزنده شما ممنونم.